ENZYMATIC STUDIES IN MICROEMULSIONS

Η ΧΡΗΣΗ ΜΙΚΡΟΓΑΛΑΚΤΩΜΑΤΩΝ ΝΕΡΟΥ ΣΕ ΕΛΑΙΟ Η ΑΝΤΙΣΤΡΟΦΑ ΜΙΚΚΥΛΙΑ, ΓΙΑ ΤΗ ΔΙΑΛΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗ ΕΝΖΥΜΩΝ ΕΧΕΙ ΓΝΩΡΙΣΕΙ ΑΝΑΠΤΥΞΗ, ΧΑΡΙΣ ΣΤΗ ΔΙΑΠΙΣΤΩΣΗ ΟΤΙ ΚΑΤΩ ΑΠΟ ΠΡΟΥΠΟΘΕΣΕΙΣ ΤΑ ΕΝΖΥΜΑ ΔΙΑΤΗΡΟΥΝ ΤΗΝ ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΗ ΤΟΥΣ ΔΡΑΣΗ ΣΤΟ ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝ ΑΥΤΟ. ΤΟ ΜΕΓΑΛΟ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΝ ΟΦΕΙΛΕΤΑΙ ΚΥΡΙΩΣ ΣΤΙΣ ΠΟΛΥΑΡΙΘΜΕΣ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΕΣ ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ. ΣΤΗ ΠΑΡΟΥΣΑ ΔΙΑΤΡΙΒΗ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ Η ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΗ ΣΥΜΠΕΡΙΦΟΡΑ ΤΗΣ ΘΡΥΨΙΝΗΣ ΚΑΙ ΤΗΣ Α-ΧΥΜΟΘΡΥΨΙΝΗΣ ΣΕ ΔΥΟ ΕΙΔΗ ΜΙΚΡΟΓΑΛΑΚΤΩΜΑΤΩΝ. ΕΞΕΤΑΣΤΗΚΕ Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΠΑΡΑΜΕΤΡΩΝ ΟΠΩΣ PH, ΕΙΔΟΣ ΕΠΙΦΑΝΕΙΟΕΝΕΡΓΟΥ (AOT, CTAB), ΕΙΔΟΣ ΣΥΝ-ΕΠΙΦΑΝΕΙΟΕΝΕΡΓΟΥ, ΒΑΘΜΟΥ ΕΝΥΔΑΤΩΣΗΣ, ΣΤΗΝ ΕΝΖΥΜΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ. Η ΕΝΖΥΜΙΚΗ ΣΥΜΠΕΡΙΦΟΡΑ ΔΕΝ ΜΕΤΑΒΑΛΛΕΤΑΙ ΣΗΜΑΝΤΙΚΑ ΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΑΥΤΑ. ΣΕ ΟΛΕΣ ΤΙΣ ΠΕΡΙΠΤΩΣΕΙΣ Η ΕΝΖΥΜΙΚΗ ΥΔΡΟΛΥΣΗ ΑΚΟΛΟΥΘΕΙ ΚΙΝΗΤΙΚΗ MICHAELIS-MENTEN. ΣΤΗ ΣΥΝΕΧΕΙΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΔΟΜΙΚΗΣ ΜΕΛΕΤΗΣ (ΗΛΕΚΤΡΙΚΗ ΑΓΩΓΙΜΟΤΗΤΑ, ΦΘΟΡΙΣΜΟΣ, ΣΚΕΔΑΣΗ ΑΚΤΙΝΩΝ-Χ ΣΕ ΜΙΚΡΕΣ ΓΩΝΙΕΣ) ΓΙΑ ΝΑ ΔΙΕΡΕΥΝΗΘΕΙ Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΠΑΡΟΥΣΙΑΣ ΣΤΑ ΔΟΜΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΩΝ ΑΝΤΙΣΤΡΟΦΩΝ ΜΙΚΚΥΛΙΩΝ. ΤΕΛΟΣ ΕΓΙΝΕ ΜΙΑ ΠΡΟΣΠΑΘΕΙΑΣΥΣΧΕΤΙΣΗΣ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΚΑΙ ΔΟΜΗΣ, ΓΙΑ ΜΙΑ ΕΣΤΕΡΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΤΑΛΥΟΜΕΝΗ ΑΠΟ ΛΙΠΑΣΗ, ΜΕ ΧΡΗΣΗ ΗΛΕΚΤΡΙΚΗΣ ΑΓΩΓΙΜΟΤΗΤΑΣ ΚΑΙ ΣΚΕΔΑΣΗΣ ΑΚΤΙΝΩΝ-Χ ΣΕ ΜΙΚΡΕΣ ΓΩΝΙΕΣ.IT HAS BEEN SHOWN THAT MANY ENZYMES CAN BE SOLUBILIZED IN THE AQUEOUS CORE OF WATER IN OIL MICROEMULSIONS AND RETAIN CATALYTIC ACTIVITY. THE STUDY OF PROTEINS ENTRAPPED IN SUCH SYSTEMS HAS ATTRACTED INCREASING INTEREST DUE TO NUMEROUSPOSSIBLE APPLICATIONS OF BIOTECHNOLOGICAL INTEREST. IN THE PRESENT STUDY WE EXAMINE THE CATALYTIC BEHAVIOUR OF TWO PROTEOLYTIC ENZYMES, A-CHYMOTRYPSIN AND TRYPSIN, IN TWO TYPES OF MICROEMULSIONS. THE EFFECT OF VARIOUS PARAMETERS SUCH AS PH, KIND OF SURFACTANT (AOT, CTAB) AND CO-SURFACTANT, WATER CONTENT, ONTHE ENZYME ACTIVITY WAS STUDIED. THE CATALYTIC BEHAVIOUR WAS NOT AFFECTED IN THE NEW MICROHETEROGENEOUS ENVIRONMENT AND REACTIONS WERE SHOWN TO FOLLOW IN ALL CASES MICHAELIS-MENTEN KINETICS. IN THE SECOND PART OF THE STUDY, SOME PHYSICOCHEMICAL METHODS WERE UNDERTAKEN (ELECTRIC CONDUCTIVITY, TIME-RESOLVED FLUORESENCE, SMALL ANGLE X-RAY SCATTERING) IN ORDER TO ELUCIDATE THE EFFECT OF THE ENZYME PRESENCE ON THE STRUCTURE OF REVERSE MICELLES. FINALLY, AN ESTERIFICATION REACTION CATALYZED BY LIPASE WAS CARRIED OUT IN MICROEMULSIONS. AN ATTEMPT WAS DONE TO RELATE REACTIVITY WITH STRUCTURE BY USING SMALL ANGLE X-RAY SCATTERING AND BY MEASURING THE ELECTRICAL CONDUCTIVITY