STUDY OF REGULATION OF THE ORNITHINE DECARBOXYLASE ACTIVITY BY ANTIENZYME IN THE BACTERIA ESCHERICHIA COLI AND THERMUS THERMOPHILUS

THE PURPOSE OF THIS WORK WAS TO FIND AND CHARACTERIZE THE E.COLI ANTIENZYME (AZ) GENE. THE AZ GENE WAS IDENTIFIED. A 6.4 KB DNA FRAGMENT CONTAINING THE ANTIZYME GENE WAS CLONED IN VECTOR PUC19. E. COLI CELLS WERE TRANSFORMED WITH THE RESULTING PLASMID PUC-AZ. THE AZ OVERPRODUCTION WAS PROVED IN THESE CELLS. THE 6.4KB SEQUENCE WAS DETERMINED. TWO OPEN READING FRAMES WITH SIZES CAPABLE OF ENCODING THE AZ WERE FOUND. IT WAS PROVED THAT THE AZ GENE IS ORF2. HOMOLOGIES TO OTHER BACTERIAL PROTEINS SUGGEST THAT THE AZ AND THE PROTEIN THAT IS ENCLOSED BYORF1 POSSIBLY COMPOSE A SYSTEM THAT REGULATES THE TRANSCRIPTION OF OTHER GENES. ANTIZYME WAS DETECTED AND PARTIALLY PURIFIED FROM THERMUS THERMOPHILUS.ΣΤΟΧΟΣ ΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΗΤΑΝ ΝΑ ΒΡΕΘΕΙ ΚΑΙ ΝΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΕΙ ΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ ΤΟΥ ΑΝΤΙΕΝΖΥΜΟΥ ΤΗΣ E.COLI. ΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ ΤΟΥ ΑΝΤΙΕΝΖΥΜΟΥ (ΑΖ) ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΚΑΙ ΕΝΑ ΚΟΜΜΑΤΙ ΜΗΚΟΥΣ 6,4 ΚΒ ΣΤΟ ΟΠΟΙΟ ΠΕΡΙΕΧΕΤΑΙ, ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΣΤΟΝ ΦΟΡΕΑ PUC19 ΚΑΙ ΕΙΣΗΧΘΗΚΕΣΕ ΚΥΤΤΑΡΑ E.COLI. Η ΥΠΕΡΠΑΡΑΓΩΓΗ ΤΟΥ ΑΖ ΣΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΑΥΤΑ ΑΠΟΔΕΙΧΘΗΚΕ. Η ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑ ΤΩΝ 6,4 ΚΒ ΑΝΑΛΥΘΗΚΕ. ΜΕΣΑ ΣΕ ΑΥΤΗ ΤΗΝ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑ ΒΡΙΣΚΟΝΤΑΙ ΔΥΟ ΑΝΟΙΚΤΑ ΠΛΑΙΣΙΑ ΑΝΑΓΝΩΣΗΣ ΜΕ ΜΕΓΕΘΟΣ ΙΚΑΝΟ ΝΑ ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΗΣΕΙ ΤΟ ΑΖ. ΑΠΟΔΕΙΧΘΗΚΕ ΟΤΙ ΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ ΤΟΥ ΑΖ ΕΙΝΑΙ ΤΟ ORF2. ΑΠΟ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΑΛΛΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ ΠΡΟΚΥΠΤΕΙ ΟΤΙ ΠΙΘΑΝΟΝ ΤΟ ΑΝΤΙΕΝΖΥΜΟ ΚΑΙ Η ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΠΟΥ ΕΚΦΡΑΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟ ORF1, ΑΠΟΤΕΛΟΥΝ ΕΝΑ ΣΥΣΤΗΜΑ ΠΟΥ ΡΥΘΜΙΖΕΙ ΤΗ ΜΕΤΑΓΡΑΦΗ ΑΛΛΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ. ΕΠΙΣΗΣ, ΑΝΙΧΝΕΥΘΗΚΕ ΚΑΙΚΑΘΑΡΙΣΤΗΚΕ ΜΕΡΙΚΑ ΑΝΤΙΕΝΖΥΜΟ ΑΠΟ THERMUS THERMOPHILUS