D028 L’expression des gènes PAI-1, tPA et uPA est fortement régulée pendant la différenciation des cellules souches embryonnaires en myocytes et adipocytes

PAI-1 est l’inhibiteur physiologique des activateurs du plasminogène uPA et tPA et inhibe le complexe formé entre uPA et son récepteur, et par voie de conséquence, entre la vitronectine et l’intégrine alphav beta3. PAI-1 est impliqué dans l’adhésion et la migration des cellules endothéliales, dans la différenciation adipocytaire et dans la réponse à l’insuline; in vivo, il facilite la thrombose, la fibrose et le remodelage tissulaire. Des taux élevés circulants de PAI-1 représentent un biomarqueur de l’obésité centrale et sont un facteur pronostic du diabète de type 2. Les propriétés biologiques de PAI-1 ont conduit à l’hypothèse que PAI-1 serait impliqué directement dans le développement du tissu adipeux. Notre objectif est d’évaluer les rôles spécifiques des gènes PAI-1, uPA et tPA dans les mécanismes moléculaires de la différenciation des cellules souches embryonnaires (cellules ES) de souris dans différents lignages.Indétectables à l’état indifférencié, les expressions de PAI-1, uPA et tPA et les activités enzymatiques uPA et tPA sont fortement régulées durant la différenciation des cellules ES. Les activités uPA et tPA sont rapidement augmentées durant la phase précoce de détermination du processus, sans expression détectable de PAI-1. Puis, l’expression de PAI-1 augmente progressivement dans les surnageants de culture des cellules bien différenciées, corrélant avec une inhibition concomittante des activités uPA et tPA. Des expériences d’immunohistochimie montrent que PAI-1 est exprimé à la fois dans les myotubes et dans les adipocytes matures.Le rôle potentiel de ces régulations successives est analysé par la construction de lignées de cellules ES surexprimant le cDNA de PAI- 1 dès l’état indifférencié. Les effets d’une surexpression ectopique de PAI-1 à différent temps pendant la différenciation des cellules ES sont recherchés.De plus, le traitement précoce des cellules ES en différenciation par l’amiloride, inhibiteur spécifique d’uPA, provoque une diminution de la myogénèse et une augmentation de la différenciation adipocytaire. Par contre ces effets ne sont pas retrouvés en traitant les cellules par l’EACA, inhibiteur de la plasmine ou le DMA, un dérivé inactif de l’amiloride