Autoradiographic studies of solute transport across the toad bladder

AbstractAutoradiographic studies of solute transport across the toad bladder. The autoradiography of diffusible, hydrophilic solutes presents special problems in localization of the labeled solute under study. We present studies of the movement of14C-labeled urea, and14C- and3H-labeled sucrose across the isolated urinary bladder of the toad, a vasopressin-sensitive epithelium, using a technique that avoids exposure to water throughout all processing steps and minimizes error caused by isotope scatter. We have shown a significant increase in14C urea entry into epithelial cells following vasopressin, and a significant decrease following phloretin, an agent that selectively blocks vasopressin-stimulated urea transport. The autoradiographic technique confirms the luminal site of action of phloretin. Studies of14C and3H sucrose labeling show that this molecule is virtually excluded from the cell. The current method of grain counting is capable of yielding reliable information in studies of epithelial transport.Etudes autoradiographiques du transport de solutés à travers la vessie de crapaud. L'autoradiographie de solutés diffusibles et hydrophiles pose des problèmes spéciaux de localisation du soluté marqué étudié. Nous présentons des études du mouvement de l'urée marquée au14C, et du sucrose marqué au14C et au3H à travers la vessie de crapaud isolée, un épithélium sensible à la vasopressine, à l'aide d'une technique qui évite l'exposition à l'eau pendant toutes les étapes et minimise l'erreur due à la dispersion de l'isotope. Nous avons montré une augmentation significative de l'entrée de14C urée dans les cellules épithéliales après vasopressine, et une diminution significative après phlorétine, un agent qui bloque sélectivement le transport de l'urée stimulé par la vasopressine. La technique autoradiographique confirme le site d'action luminal de la phlorétine. Des études de marquage du sucrose du14C et au3H montrent que cette molécule est virtuellement exclue de la cellule. La méthode habituelle de comptage de grains peut fournir une information fiable dans les études de transport épithélial