Role of Purinergic P2X7 and Apoptosis Fas Receptors in T Lymphocyte Homeostasis and Autoimmune Desease Developpement

Mon étude a porté sur le rôle du récepteur purinergique P2X7 (P2X7R) dans les processus physiopathologiques impliqués dans le développement des maladies auto-immunes de type lupique. Les souris MRL/lpr, déficientes en récepteurs d’apoptose Fas (mutation lpr), développent spontanément ces pathologies suite à l’accumulation lymphocytes T pathogéniques CD4−CD8− (DN) B220+ dans les organes lymphoïdes secondaires. Nous avons observé que ces lymphocytes ont également un déficit d’expression en P2X7R à leur surface. Cela nous a amené à postuler que P2X7R pourrait jouer un rôle clé dans l’homéostasie des lymphocytes T et le développement du lupus. Afin de vérifier notre hypothèse, nous avons produit des souris C57BL/6J (B6) déficientes simultanément pour Fas (lpr) et P2X7R (P2X7KO). Ces souris présentent une accumulation massive de lymphocytes T DN B220+ et des titres très élevés en auto-anticorps et en cytokines proinflammatoires ce qui n’est pas le cas pour les souris B6 simples mutantes lpr ou P2X7KO confirmant pour la première fois l’implication de P2X7R dans l’homéostasie des lymphocytes T, en synergie avec le récepteur Fas. Les lymphocytes T DN pathogéniques responsables de la lymphoaccumulation sont issues majoritairement de la sous populations des lymphocytes T CD8+. L’inflammation chronique présente chez les souris B6/lpr P2X7KO induit l’activation de l’ensemble des populations lymphocytaires T CD4+ et CD8+ naïves conduisant à l’accumulation de lymphocytes T Effecteurs/Mémoires : EM et CM et atteignent parfois le stade exhausted PD1+TIM3+. Ces cellules accumulées CD4+, CD8+ et DN B220+ ont une capacité de réactivation réduite. Ce biais fonctionnel et phénotypique a été confirmé en comparant la réponse immunitaire adaptative anti-adénovirus entre des souris déficientes en Fas et/ou P2X7R. Les réponses cellulaires et humorales sont moins importantes dans les souris B6/lpr P2X7KO que B6, B6-P2X7KO. Ces réponses antivirales sont intermédiaires dans les souris B6/lpr. L’ensemble de ces résultats renforcent notre hypothèse sur le rôle synergique des récepteurs Fas et P2X7R dans l’homéostasie des lymphocytes T. Le taux d’apoptose induit par l’activation des récepteurs Fas ou P2X7R séparément est moins important dans les lymphocytes T CD8+ par rapport au lymphocytes T CD4+. La synergie Fas-P2X7R serait donc nécessaire pour l’homéostasie des lymphocytes T CD8+. Afin de préciser les mécanismes à l’origine de la maladie et d’identifier l’influence de chaque récepteur sur l’expression des loci de susceptibilité, nous avons séquencé les ARNm exprimés dans la rate et les ganglions lymphatiques des souris MRL/lpr avant et après le développement de l’auto-immunité ainsi que chez les souris B6, B6/lpr, B6 P2X7KO et B6/lpr P2X7KO.My project aims to determine the role of the purinergic receptor P2X7 (P2X7R) in the pathophysiological processes involved in the development of autoimmune lupus-like syndrome. MRL/lpr mice, deficient for the cell death receptor Fas (lpr mutation), spontaneously develop this pathology following the accumulation of pathogenic B220+CD4−CD8− (DN) T lymphocytes in secondary lymphoid organs. We have observed that these lymphocytes are also deficient in P2X7R cell surface expression. This led us to hypothesize that P2X7R could play a key role in T cell homeostasis and lupus development. To test our hypothesis, we produced B6 mice deficient for both Fas (lpr) and P2X7R (P2X7KO). These mice, but not single mutant B6 mice (lpr or P2X7KO), develop a massive accumulation of DN B220+ T lymphocytes and high levels of autoantibodies and proinflammatory cytokines, confirming for the first time the involvement of P2X7R in T-cell homeostasis. I have found that the pathogenic DN T lymphocytes are predominantly derived from the CD8+ T lymphocyte subpopulation. Chronic inflammation in B6/lpr P2X7KO mice induces the activation of the whole CD4+ and CD8+ naïve T lymphocyte subpopulations leading to the accumulation of Effector/Memory and exhausted T lymphocytes. Accumulated T-cells lose the ability to be reactivated. To confirm these results, I compared the adaptive immune response against adenovirus between mice deficient for Fas (lpr mutation), P2X7R-deficient mice or both receptors. The cellular and the humoral responses were lower in the B6/lpr-P2X7KO mouse strain compared to B6, B6-P2X7KO and B6/lpr mouse strains. The antiviral immune response in the B6/lpr mice was lower than in B6 and B6-P2X7KO mice. These results reinforce our hypothesis about the synergistic role of both receptors in the maintaining of T cell homeostasis. Ours results suggest that Fas and P2X7R play their synergistic role in T-cell homeostasis. In collaboration with a team from the University of Taiwan, we sequenced the mRNAs expressed in the spleen and lymph nodes of MRL/lpr mice before and after the onset of the diseases as well as in the B6, B6/lpr, B6 P2X7KO and B6/lpr P2X7KO mouse strains in order to better understand the mechanism triggering the disease and to identify the role of each receptor on the expression of the susceptibility loci