Distributions of Alpha-amylase, Beta-amylase and Tyrosinase in Biological Granules & Flocs

本論文提出以免疫染色的原理，用帶有螢光的抗體對生物聚集體內之酵素進行定位。再搭配胞外聚合物質螢光染劑及共軛聚焦顯微鏡（Confocal Laser Scanning Microscope），則可同時建構觀察生物聚集體內酵素及胞外聚合物質之分佈，並進一步了解生物聚集體內部的生物活動。 由本實驗觀察到在成長中的菌類表面周圍有α-amylase的富集。亦在饑餓狀態及儲存冷藏的生物顆粒中菌群周圍發現β-amylase。真菌類擁有之tyrosinase酵素亦在胞內及胞外都可發現。實驗也針對抗體染色所需的時間進行擴散紀錄，由此得到適合樣本的染色作用時間。This work proposed a method that using immunohistochemistry in the biological granules and flocs. We can see distributions of enzymes in these bioaggregates by Confocal Laser Scanning Microscope (CLSM). Combining with EPS staining method, we can know EPS and distributions of enzymes in biological granules and flocs. In this study, we found α-amylase distribution on the surface of bacteria. β-amylase can be found around the bacteria which storaged in the refrigerator. Tyrosinase can be found in the intracellular and extracellular region. The proposed scheme provides more detail about EPS and enzymes’ distributions in biological granules and flocs.摘要 IBSTRACT II錄 III目錄 V目錄 VIII一章 前言 1二章 文獻回顧 2 2-1膠羽組成與結構 2 2-2生物顆粒組成與結構 2 2-3生物聚集體內部的酵素作用 3 2-3-1多醣酵素 4 2-3-2其他酵素 4 2-4 EPS染色法 5 2-5免疫染色 5三章 實驗樣本與染色方法 7 3-1實驗樣品 7 3-2 EPS染色法 9 3-2-1 EPS染色方式 10 3-3免疫染色法 10 3-3-1免疫染色流程 11 3-4多重染色法 11 3-4-1多重免疫染色原則 11 3-4-2染色順序 13 3-4-3螢光波長選擇 13 3-4-4染色流程 13 3-5冷凍切片 14 3-6共軛聚焦顯微鏡 14 3-7擴散實驗 14四章 結果與討論 16 4-1抗體擴散實驗結果 16 4-2多重染色激發與收光選擇 22 4-3 α-amylase的分佈 24 4-4 β-amylase的分佈 33 4-5 Tyrosinase的分佈 41五章 結論 46考文獻 4