已發表的報告中已指出,缺氧後的肝 臟會有促進肝再生的現象,而且兩者成正 相關的關係;另有報告發現在肝臟切除手 術前先給予刺激(如剖腹探查)同樣的可 以增進肝臟的再生,但確切的機制及基因 被誘發表現或抑制表現的程度其增減上並 沒有研究報告得說明之。 本研究將以大鼠肝臟缺氧後(各處理 為:缺血零分鐘,缺血三十分鐘,缺血六 十分鐘)再行切除的模式,收集術後6 小 時及24 小時的肝臟檢體研究缺氧對肝臟 切除後肝再生的影響,並將收集的檢體儲 存於-70℃。實驗時將檢體取出部份以液態 氮及研缽研磨後萃取mRNA反轉錄成第一 股cDNA 後再合成第二股cDNA,合成的 cDNA 以兩種不同切位的限制脢切割酵素 切割後,接上特殊人為設計的轉接器即形 成兩端具已知序列的cDNA 片段。 進行AFLP 分析時則以外加2~3 個氨 基酸的引子數對來進行聚合脢放大反應放 大cDNA 片段以供定序電泳分析片段差 異,此法可取得不同處理間的具相異性片 段,回收這些片段作序列分析及相似性比 對,即可知道這些相異片段為哪些基因的 部分序列並推得受處理的檢體中基因層面 所受的影響。 在此研究中,我們針對這不同處理的7 個檢體以兩端各八個引子(共16 個引子), 進行排列組合進行片段放大工作,獲得64 種組合結果,再接者將放大反應得到的產 物以電泳膠分析後,選取具差異性意義之 片段,並切下、給予編號保留此片段,然 後對照以其引子對再次放大進行序列分 析,此階段共獲得126 個具處理間差異的 片段進行定序工作。 經過DNA 定序以及比對的結果,總 共獲得68 個在不同的處理組合中有不同 表現量的基因,所包含的基因種類有:代 謝,生長相關,肝臟再生,結構性蛋白質, 神經生成,凝血機制相關,訊息傳導,細 胞連結,原...