Reação em cadeia da polimerase (PCR) : valor diagnóstico na hanseníase neural pura

Orientador: Lineu César WerneckTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduaçâo em Medicina Interna. Defesa: Curitiba, 2003Inclui bibliografia e anexosResumo: A hanseníase é uma doença infecto-contagiosa crônica que compromete os nervos, a pele e outros tecidos. É difícil fazer o diagnóstico da hanseníase neural pura (HNP). Este trabalho objetivou estudar o valor diagnóstico da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e sua correlação com a histopatologia dos nervos na hanseníase neural pura (HNP). Foram estudados 58 pacientes com suspeita diagnóstica de HNP no Serviço de Doenças Neuromusculares do Hospital de Clínicas da UFPR, Curitiba, e do Centro de Saúde Dona Libânia, unidade de referência em hanseníase no Estado do Ceará, Fortaleza. Todos os casos foram submetidos a um protocolo pré-determinado constando de anamnese, exame dermato-neurológico, rotina laboratorial simples, pesquisa baciloscópica, eletroneuromiografia, histopatologia e PCR de amostras de biópsias de nervos selecionados. O nervo biopsiado foi dividido em dois fragmentos: um para histopatologia e outro para PCR. Da amostra para a PCR foi extraído o DNA e feito amplificação da seqüência específicarepetida do DNA Mycobacterium leprae, conforme Woods e Cole (1989). Dos 58 pacientes, 41 (70,7%) eram do sexo masculino e 17 (29,3%) do feminino. A idade média dos pacientes BT foi de 45,0 (± 18,2) anos, variando de 15 a 77 anos, (mediana de 44,5). Nos pacientes TT a idade média foi 36,2 (± 9,2) anos, variando de 17 a 53 anos, (mediana de 35,0 anos). O tempo de doença até o diagnóstico foi de 2,3 (± 2,2) anos, (mediana de 1,5 ano) na forma BT. Na forma TT foi de 2.0 (± 2,9) anos, (mediana de 1,0 ano). Os doentes puderam ser classificados de acordo com Ridley e Jopling (1966) em Borderline- Tuberculóide (BT), 40 casos (69%) e Tuberculóide polar (TT), 18 casos (31%). Os principais nervos comprometidos foram o ulnar (33,0%), o fibular comum (10,7%), o fibular superficial (16,1%) e o sural (17,3%). Os padrões de neuropatia foram: sensitivo-motora múltipla, 36 casos (62,1%); sensitivo-múltipla, 7 casos (12,0%); mononeuropatia sensitivomotora, 11 casos (19,0%) e mononeuropatia sensitiva, 4 (6,9%). O nervo sural foi biopsiado em 38 pacientes (65,5%). O BAAR foi positivo nos nervos de 20 doentes, 34,5% do total dos casos, sendo 50% dos BT e nenhum TT. A PCR foi positiva nas amostras dos nervos de 29 (50%) do total dos doentes, sendo 27 pacientes (67,5%) na forma BT e 2 (11,0%) na forma TT. A PCR é um método útil no diagnóstico da hanseníase neural pura. Sua aplicação permite confirmar o diagnóstico de hanseníase, mesmo nos casos de biópsias neurais BAAR negativas.ABSTRACT: Leprosy is a disease of nerves, skin and other tissues. Some times is difficult to make the diagnosis of the pure neural leprosy (PNL). To improve the diagnosis this study was done with the following objectives: 1. To study the diagnosis importance of the polymerase chain reaction in PNL; 2. To verify the relationship between the histolopathological changes in the nerve and PCR for DNA of M.leprae. Fifty-eight patients with clinical suspicion of PNL were studied. They were patients from the Service of Neuromuscular Diseases of the Clinical Hospital of UFPR and Dona Libania Health Center (a reference unit for leprosy in the state of Ceará). All cases were submitted to a pre-determined protocol including anamnesis, dermatoneurological examination, laboratorial routine, bacilloscopia research, electroneuromiography, histopatology and PCR of the selected nerves. The nerve biopsy was divided in two fragments: one for PCR and another for histological study. From the sample for PCR, DNA was extracted and the sequence of DNA M-lepraespecifc was amplified according to Woods and Cole (1989). After it was visualized with plates of agarose gel, was compared with positive and negative controls for M.leprae with another non-leprosy neuropathy. From 58 patients, 41 (70.7%) were males and 17 (29.3%) females. The age varied from 15 to 77 years (mean 45.0 years) in to BT forms and to TT forms the age varied 17 to 53 years (mean mean 36,2 years). The evolution of the disease ranged from 2.3 years (mean of 1.5 year) in to BT cases and to TT cases was 2.0 years (mean 1.0 year). The patients were classified according to Ridley and Jopling (1966) in to Borderline-Tuberculoid BT 40 cases (69%) and Tuberculoid polar TT 18 cases (31%). The main nerves involved was ulnar (33.0%), common peroneal (10.7%), superficial peroneal (16.1%) and sural (17.3%). The patterns of neuropathy: multiple motor-sensitive 36 cases (62.1%), multiple sensitive 7 cases (12.0%), motor-sensitive mononeuritis 11 cases (19.0%), sensitive mononeuritis 4 cases (6.9%). The sural nerve was biopsied in 38 cases (65.1%). The Acid-fast-bacilli (AFB) was positive in the nerves of 20 cases (34.4%) of BT in none of TT. The PCR was positive in the nerves of 29 patients (50%). Of these, 67,5% in to BT cases and 11,0% TT cases. The PCR is a useful diagnostic method in pure neural leprosy and allow the confirmation of the diagnoses in AFB negative nerves