Interações de proteínas salivares epolifenóis

Orientadora : Profª Drª Elaine Machado BenelliDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 28/03/2016Inclui referências : f. 50-66Resumo: A saliva é um fluído produzido pelas glândulas salivares maiores, menores, fluídos gengivais e nasais, composta por proteínas e glicoproteínas. As proteínas salivares adsorvem-se a superfície da hidroxiapatita logo após a higiene bucal, formando a película dental adquirida do esmalte. A sua função é proteger o esmalte contra desmineralização e permitir a adsorção de bactérias originando o biofilme dental. Os microrganismos que compõe o biofilme dental permanecem em equilíbrio em condições compatível com a saúde. Entretanto, mudanças no comportamento do hospedeiro, alteram o equilíbrio do biofilme favorecendo o aparecimento da cárie e doença periodontal. Os polifenóis podem interagir com proteínas salivares e alterar sua conformação, modificando estrutura e função da película dental adquirida do esmalte. O objetivo deste trabalho foi verificar as interações dos polifenóis resveratrol, epigalocatequina-galato, epigalocatequina e ácido gálico com saliva total. O pool de saliva estimulada coletado foi diluído e concentrações crescentes de cada um dos polifenois foram adicionados. Em seguida, o espectro emissão de fluorescência de 300 a 500 nm das amostras com excitação em 282 nm foram obtidos. Os resultados mostraram que com o aumento da concentração dos polifenois ocorreu diminuição da emissão de fluorescência do triptofano em 350 nm. Esta redução foi maior para epigalocatequina-galato, seguido do resveratrol e epigalocatequina. Ácido gálico não interagiu com as proteínas salivares nas condições testadas. A epigalocatequina-galato interage com as proteínas salivares por mecanismos dinâmicos e estáticos, enquanto que os demais polifenois interagem por mecanismo dinâmico ou colisional. Além disso, todos os polifenois foram capazes de reduzir a atividade da amilase salivar. Entretanto, as interações dos polifenois e as proteínas da saliva total só foi observada em concentrações superiores as obtidas através da dieta. Assim, este estudo sugere que provavelmente in vivo estes polifenois não seriam capazes de afetar a estrutura e atividade dos complexos de proteínas salivares e manteriam a homeostase do organismo. Palavras chaves: Polifenois, Saliva, Proteínas e Peptídios salivaresAbstract: Saliva is a fluid produced by the salivary major and minor glands, gingival and nasal fluids, composed of proteins and glycoproteins. The salivary proteins adsorb to the hydroxyapatite surface after oral hygiene, forming a dental film called the enamel acquired pellicle. Its function is to protect against the enamel demineralization and allow adsorption of bacteria forming the dental biofilm. Microorganisms in the biofilm remain in equilibrium under conditions compatible with health, however, changes in host behavior, alter the balance of the biofilm leading to caries and periodontal disease. The polyphenols can interact with salivary proteins and change their conformation by modifying the structure and function of dental enamel film acquired accordingly. The aim of this study was to study the interactions of polyphenol resveratrol, epigallocatechin gallate, epigallocatechin and gallic acid with total saliva. The stimulated saliva was collected and the pool was diluted and increasing concentrations of each polyphenol were added. Following, emission spectrums of the fluorescence of the total saliva (300 to 500 nm) with excitation at 282 nm were obtained. The results showed that with the increase of the polyphenols occurred a decreased tryptophan fluorescence emission at 350nm. This reduction was major for epigallocatechin-gallate, followed by resveratrol and epigallocatechin. Gallic acid did no interacted to total saliva protein at this experimental condition. The epigallocatechin-gallate interacts with salivary proteins by dynamic and static mechanisms, while other polyphenols interact by dynamic mechanism or collisional. Moreover, all polyphenols were able to reduce the activity of salivary ?-amilase. However, the polyphenols interactions with the total of salivary protein were observed at concentration higher than those obtained by the diet. Thus, this study suggests that probably in vivo these polyphenols are not able to alter the structure and activity of the salivary protein complex and it would keep the organism homeostasis. Key words: Polyphenols, Saliva, Proteins and Peptides salivar