Avaliação dos efeitos do óleo de peixe e da capsaicina no câncer, abordagem in vitro e in vivo

Orientadora: Dra. Iara Messias ReasonCoorientador: Dr. Luis Claudio FernandesTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 19/12/2014Inclui referências: p. 106-122Resumo: Modificações no padrão dietético ocorridas nos últimos 200 anos promoveram redução no consumo de ácidos graxos poli-insaturados (AGPI) n-3, elevação no consumo de gordura total, saturada e rica em AGPI n-6. Os ácidos graxos poli-insaturados (AGPI) n-3, em especial o ácido graxo eicosapentaenoico (EPA) e docosahexahenóico (DHA), desempenham diferentes efeitos na prevenção do câncer e/ou redução do tumor, menor proliferação das células tumorais e maior peroxidação lipídica. Em adição, atenuam os efeitos da caquexia oncológica e modulam a resposta imunológica. Entretanto, a investigação dos efeitos biológicos do óleo de peixe combinado com outras substâncias de interesse biológico ainda é insuficiente para o delineamento de condutas combinadas para o paciente oncológico. A capsaicina ou 8-metil-N-vanilil 1-6 nonamida, nos últimos dez anos tem sido considerada uma substância promissora, uma vez que seus efeitos sugerem propriedades antitumorais pela indução da apoptose, evento esse fundamental no controle da disseminação de células tumorais. Objetivo: Avaliar o efeito isolado e combinado da suplementação com óleo de peixe e capsaicina sobre o tumor de Walker 256 e em linhagens tumorais. Metodologia: Para a abordagem in vivo utilizamos o modelo do tumor de Walker 256, sendo avaliados: parâmetros de caquexia, crescimento tumoral, resposta leucocitária e função renal e hepática. Para a abordagem in vitro foram utilizadas 4 linhagens celulares: B16F10 (melanoma murino), HeLA (câncer de colo do útero), McCoy (Fibroblasto murino) e HepG2 (hepatocarcinoma humano), sendo avaliadas proliferação, viabilidade, apoptose e necrose. Resultados: O óleo de peixe e a capsaicina, isolados ou combinados reduziram significativamente a massa e a proliferação tumoral. Tanto o ômega 3 isolado, quanto combinado com a capsaicina promoveram ganho de massa corporal no período de indução tumoral; aumento no percentual de células apoptóticas e ainda, efeito anti-caquexia. As funções hepáticas e renais em todos os grupos suplementados e tratados foram preservadas. O óleo de peixe e a capsaicina, isolados ou associados reduziram a proliferação linfocitária e promoveram aumento na população dos linfócitos TCD8+ somente nos animais com tumor. A fagocitose e a produção de ânion superóxido em macrófagos e neutrófilos mostrou-se elevada nos grupos suplementados e tratados; enquanto que a retenção de vermelho neutro apresentou-se diferente entre macrófagos e neutrófilos. Na presença de tumor, somente a capsaicina isolada foi capaz de promover elevação na produção de óxido nítrico. Nos modelos in vitro o óleo de peixe e a capsaicina, isolados ou combinados reduziram a proliferação e a viabilidade das linhagens HeLA e HepG2. Óleo de peixe isolado ou associado com a capsaicina promoveu aumento da apoptose das linhagens B16F10, HeLA e HepG2, enquanto que a capsaicina isolada somente foi capaz de aumentar a taxa apoptótica da linhagem HeLA. Interessantemente as suplementações e tratamentos propostos não alteraram a proliferação e a viabilidade da linhagem de fibroblastos murinos, indicando ausência de efeito tóxico sobre células saudáveis. Conclusão: Os resultados indicam a possibilidade para o desenvolvimento de uma terapia anti-câncer combinada. Palavras-chave: Câncer. Óleo de peixe. Capsaicina. Apoptose.Abstract: Changes in dietary pattern in the last 200 years promoted a reduction in the consumption of polyunsaturated fatty acids (PUFA) n -3, high in the consumption of total fat, saturated fat and rich in n- 6 PUFA. Polyunsaturated fatty acids (PUFA) n- 3, especially eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexahenóico (DHA) perform different effects on cancer prevention and / or reduction of the tumor, reduced proliferation of tumor cells and increased peroxidation lipid. In addition, mitigate the effects of cancer cachexia and modulate the immune response. However the evidence of the biological effects of fish oil combined with other substances of biological interest is still insufficient for the design of pipelines combined front to cancer patients. Capsaicin or 8 - methyl - N - vanillyl nonamide 1-6 in the last ten years has been considered a promising substance, its effects suggest antitumor properties by inducing apoptosis, a key event in controlling the spread of tumor cells. Objective: To evaluate the single and combined effect of supplementation with fish oil and capsaicin on cancer models in vitro and in vivo . Methodology: We used in vivo model of Walker 256 tumor and evaluated parameters of cachexia, tumor growth, leukocyte response and renal and hepatic function. Four cell lines were used for in vitro approach: B16F10 ( murinemelanoma), HeLa (cervical cancer), McCoy (murine fibroblast) and HepG2 (human hepatocellular carcinoma ). Results: Fish oil and capsaicin, alone or in combination significantly reduced the tumoral weight and proliferation. Isoleted omega 3 or combined with capsaicin promoted body weight gain during tumor induction; increase in the percentage of apoptotic cells and also anti-cachexia effect. The liver and kidney functions in all supplemented and treated groups were preserved. Fish oil and capsaicin, alone or associated reduced lymphocyte proliferation and promoted an increase of CD8 + lymphocytes in the animals with tumor. The phagocytosis and superoxide anion production in neutrophils and macrophages was high in treated and supplemented groups; while neutral red retention differed among macrophages and neutrophils. In the presence of tumor, only isolated capsaicin was able to promote increase in nitric oxide production. In vitro models of fish oil and capsaicin, alone or in combination reduced the viability and proliferation of the lines HeLa and HepG2. Fish oil alone or in combination with capsaicin caused increased apoptosis of B16F10 lines, HeLa and HepG2, while the isolated capsaicin was only able to increase the apoptotic rate of the HeLa lineage. Interestingly the supplemental and proposed treatments did not affect the proliferation and viability of the murine fibroblasts strain, indicating no toxic effect on healthy cells. Conclusion:These findings may indicate the possibility of development of a cobined anticancer therapy. Keywords: Cancer. Fish oil. Capsaicin. Apoptosis