Cinética e leucocitária e estresse oxidativo relacionados às lesões laminares em cavalos com afecções gastrintestinais

Orientador : Profª. Drª. Rosangela Locatelli DittrichCo-orientador : Prof. Dr. Carlos Augusto Araújo ValadãoTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 16/03/2016Inclui referênciasÁrea de concentração: Ciências VeterináriasResumo: A fisiopatogenia da laminite é parcialmente conhecida, o que dificulta a pesquisa de tratamentos eficazes na fases prodrômica e aguda da afecção. O objetivo deste estudo foi identificar se a leucopenia, infiltração leucocitária laminar e o estresse oxidativo estão associados ao desenvolvimento de lesões laminares em cavalos com afecções gastrintestinais. Foram utilizados 37 cavalos, sendo seis saudáveis, 24 com afecções gastrintestinais letais de origem natural e sete cavalos com endotoxemia e isquemia intestinal induzidas experimentalmente. Foram coletadas amostras de tecido laminar, coração, fígado, pulmão, rim, cérebro e cerebelo para histopatologia e imuno-histoquímica. Amostras de sangue total foram coletadas somente de cavalos com síndrome cólica natural em até seis horas antes do óbito para realização do hemograma. O estudo foi dividido em quatro capítulos. O primeiro capítulo é uma revisão de literatura sobre a laminite; o capítulo II aborda a relação da leucopenia com lesões laminares e a infiltração leucocitária pela imunomarcação para calprotectina em cavalos saudáveis (grupo controle, n=6) e 18 cavalos com afecções gastrintestinais naturais, divididos em dois grupos: leucopênicos (n=7) e não leucopênicos (n=11); o capítulo III demonstra as imunomarcações para nitrotirosina e superóxido dismutase no tecido laminar do casco de cavalos hígidos (grupo controle, n=6) e de cavalos com afecções gastrintestinais (grupo doenças gastrintestinais, n=24); o capítulo IV aborda a presença e relação do estresse oxidativo sistêmico, lesões laminares, imunomarcação para nitrotirosina no casco, superóxido dismutase laminar e em múltiplos órgãos em cavalos com afecções gastrintestinais naturais e cavalos com indução experimental de endotoxemia e isquemia intestinal, divididos em dois grupos de acordo com a intensidade de imunomarcação em múltiplos órgãos para nitrotirosina: grupo lesão oxidativa (n=14) e grupo sem lesão oxidativa (n=7). Observou-se que dos 18 cavalos com síndrome cólica letal, somente em três não verificou-se lesões laminares, e que estas ocorreram na ausência de sinais clínicos; a leucopenia verificada está associada ao aumento de infiltração leucocitária laminar; as imunomarcações laminares para nitrotirosina e superóxido dismutase estão presentes somente nos cavalos com afecções gastrintestinais e não nos saudáveis, indicando que o estresse oxidativo pode estar associado ao desenvolvimento de laminite; a presença de estresse oxidativo sistêmico, com imunomarcação moderada a forte para nitrotirosina nos órgãos, está associada ao agravamento dos lesões laminares nos cavalos com doenças gastrintestinais, com menor expressão laminar da superóxido dismutase quando comparada aos outros órgãos. Conclui-se que a leucopenia está associada ao aumento da infiltração leucocitária laminar; a lesão laminar pode ser agravada por substâncias oxidantes presentes no tecido laminar na fase de desenvolvimento, e que o estresse oxidativo sistêmico contribui para o agravamento destas lesões em cavalos com afecções gastrintestinais.Abstract: The pathogenesis of laminitis is partially known, making it difficult to search for effective treatments in the prodromal or acute phase of the disease. The objective of this study were to identify if the leukopenia, laminar leukocyte infiltration and oxidative stress are associated with the development of laminar lesions in horses with gastrointestinal disorders. Thirty seven horses, being six healthy animals, 24 with lethal gastrointestinal disorders naturally occurring and seven horses with endotoxemia and intestinal ischemia induced experimentally were used throughout the study.Hoof laminar tissue and samples of heart, liver, lung, kidney, brain and cerebellum were collected for histopathology and immunohistochemistry. Blood samples were collected only in horses with natural colic syndrome within six hours before death for complete blood count. The study was divided into four sections. The section I brings a literature revision about laminitis; the section II approaches the relation between leucopenia and laminar lesions and leukocyte infiltration by calprotectin immunostaining in healthy horses (control group, n=6) and 18 horses with natural gastrointestinal disorders, distributed into two groups: leukopenic (n=7) and non leukopenic (n=11); the section III shows the immunostaining for nitrotyrosine and superoxide dismutase in hoof laminar tissue of healthy horses (control group, n=6) and in horses with natural gastrointestinal disorders (gastrointestinal disorders group, n=24); the section IV approaches the presence and the relation of systemic oxidative stress, laminar lesions, immunostaining for nitrotyrosine in the hoof and superoxide dismutase in the hoof and in organs of horses with natural gastrointestinal disorders and in horses with endotoxemia and experimentallly induced intestinal ischaemia, distributed into two groups according with the immunostaining intensity for nitrotyrosine in multiple organs: oxidative lesion group (n=14) and non oxidative lesion group (n=7). It was observed only three out 18 horses with lethal colic syndrome did not present laminar lesions, and that it occurs in the absence of clinical signs; the leukopenia was associated to increase of laminar leukocyte infiltration, and that the laminar immunostaining for nitrotyrosine and superoxide dismutase occurred only in horses with gastrointestinal diseases and not in healthy, indicating that oxidative stress may be correlated with the laminitis development; the presence of systemic oxidative stress, with moderate to strong immunostaining for nitrotyrosine in all organs, is associated to aggravation of laminar lesions in horses with gastrointestinal diseases, with lower laminar expression of superoxide dismutase when compared to other organs. It can be concluded that leukopenia is associated to increase of laminar leukocyte infiltration; the laminar lesions can be aggravated for oxidant substances present in the laminae in the development phase and that the organic oxidative stress contribute to aggravation of lesions