Études du rôle du zinc et du magnesium sur la phosphatase alcaline partiellement purifiée du placenta de rat

Avant d'entreprendre des études "IN VIVO" sur le placenta entier, les coupes ou les membranes purifiées, nous avons comparé le comportement de la phosphatase alcaline partiellement purifiée du placenta de rat, à celui des phosphatases alcalines déjà étudiées à l'état pur. La phosphatase alcaline partiellement purifiée démontre une non-spécificité pour le substrat. Lorsque la préparation partiellement purifiée est soumise â une électrophorèse sur gel de polyacrylamide, nous observons une homogénéité de l'activité phosphatasique. Cette homogénéité est aussi révélée par des études de phosphorylation. La phosphatase alcaline placentaire de rat possède un poids moléculaire de 120,000 daltons, et elle peut être dissociée en sous-unités inactives. Il fut démontré que la phosphorylation de l'enzyme se faisait au centre actif sur un résidu SERINE. Les mêmes résultats sont obtenus, que l'on se serve de membranes purifiées ou d'un homogénat de placentas. La phosphatase alcaline a un besoin absolu de zinc au centre actif et elle est fortement activée par le magnésium, ce dernier agissant sur un site effecteur. L'essai de plusieurs métaux au site effecteur montre que le Co2+ et le Cd2+ sont aussi des activateurs alors que le Zn2+ est un inhibiteur. La stabilité des complexes ALPase-métal est la suivante: Mg2+ ? CO2+ ? Zn2+ ? Cu2+ et Cd2+. Enfin, nous avons détermine les constantes et VM et KM, des différentes métallo-phosphatases, afin d'étudier l'effet des métaux sur le comportement cinétique de l'enzyme. Nos observations sont en accord avec le mécanisme décrit par PETITCLERC et al. (105). Selon ce mécanisme, l'activité de la phosphatase alcaline placentaire de rat, serait contrôlée par la présence du zinc et du magnésium au site effecteur de l'enzyme