Isolation et purification des cellules pulmonaires de cobaye et métabolisme de l'acide arachidonique

L'étude présentée dans ce manuscrit visait à isoler les cellules pulmonaires de cobaye afin de purifier différents types cellulaires et en étudier le métabolisme de l'acide arachidonique dans le but, à plus long terme, de caractériser le rôle de ces types cellulaires dans la réaction inflammatoire et l'hypersensibilité. La récupération des cellules pulmonaires fut effectuée suivant deux techniques différentes. D'abord, le lavage bronchoalvéolaire qui permet d'isoler et de purifier les macrophages alvéolaires adhérents et les éosinophiles alvéolaires. La seconde technique est la digestion enzymatique du tissu pulmonaire. Cette digestion a permis de libérer près de 800 x 106 cellules à partir d'un seul poumon de cobaye. Les cellules ont d'abord été identifiées et caractérisées grâce à la microscopique optique et électronique. De la population cellulaire récupérée, il a été possible de purifier les cellules de Clara, les cellules Foà-Kurloff, les mastocytes et les pneumocytes de type II. Seuls les résultats concernant les macrophages et les éosinophiles alvéolaires et les pneumocytes de type II sont présentés dans cette thèse. Une étude du métabolisme de l'acide arachidonique a été amorcée en étudiant la libération de TXB2 par des cellules pulmonaires isolées et par des populations de cellules pulmonaires enrichies par élutriation. Suite à la purification des cellules mentionnées plus haut, une étude plus poussée fut effectuée. On recherchait en effet la présence de plusieurs métabolites de la cyclooxygénase soit TXB2, PGE2 et 6-céto-PGF1? dans le surnageant de cellules stimulées avec différents agents. L'identification des métabolites issus de la voie métabolique de la 5-lipoxygénase a aussi été effectuée. Ainsi, les macrophages alvéolaires se sont avérés une source importante de métabolites de la voie cyclooxygénase alors qu'au contraire les éosinophiles alvéolaires de cobaye ne libéraient que peu de ces médiateurs. Les pneumocytes de type II libéraient les métabolites de la voie cyclooxygénase et possédaient l'enzyme LTA4-hydrolase permettant de transformer le leucotriène A4 en leucotriène B4. L'enzyme 5-lipoxygénase n'a pas été mis en évidence dans les pneumocytes de type II suivant nos manipulations. Enfin, les relations existant entre les pneumocytes de type II, les éosinophiles et les macrophages alvéolaires dans la réaction inflammatoire sont aussi discutées