Le complexe membranaire de l'adénylate cyclase du pancréas de rat

Le pancréas est un organe sécréteur qui régit une partie importante de la digestion des aliments. Notre étude tend à préciser et à étendre notre connaissance sur le ou les modes d'action des hormones pancréozymine (PZ ou CCK-PZ) et sécrétine, et du fluorure de sodium (NaF) sur le complexe adényla­ te cyclase du pancréas de rat. Le chapitre I décrit la distribution cellulaire et les caractéristiques de l'enzyme. A partir d'un homogénat, nous purifions une fraction contenant l'adénylate cyclase membranaire. Nous vérifions l'aspect morphologique de la préparation membranaire en microscopie électronique, Puis, nous recherchons et utilisons une méthode sensible et efficace pour doser l'activité enzymatique dans un système IN VITRO. Cette méthode se résume à l'emploi du phosphore 32 (P32) comme marqueur du substrat et la séparation adéquate du produit formé par la chromatographie sur papier. En ce qui con­ cerne l'action hormonale, l'adénylate cyclase répond à une stimulation à la sécrétine. Toutefois, l'absence de stimulation par la pancréozymine-octa- peptide (PzO) est peut-être la conséquence de la fragilité de son site récepteur. Le guanosine 5'-triphosphate (GTP) potentialise l'effet de la sécrétine sur l'adénylate cyclase, mais non celui du NaF. On peut alors sup­ poser une spécificité du GTP pour le site récepteur de la sécrétine. De plus, la stabilité de l'enzyme à o0 c et à 37°C est améliorée par l'addition de NaF et de chlorure de magnésium (MgC1 2) dans la préparation membranaire. Le chapitre II porte sur le rôle des lipides dans l'expression de l'activité de l'adénylate cyclase. On suppose que les lipides sont impliqués dans le fonctionnement même de la cyclase, Ceci est vérifié par l'emploi de phospholipases qui diminuent de façon appréciable l'activité stimulée au NaF d'une part et d'autre part par l'apparition de modifications des structures lipidiques dans la courbe d'activité de l'adénylate cyclase stimulée aussi au NaF. Par contre, des études sur la structure lipidique membranaire avec la sécrétine n'ont donné aucun résultat positif. Une-étude complémentaire avec les antibiotiques polyéniques nous ont permis de constater que ceux-ci n'ont aucun effet sur l'activité stimulée hormonalement et au NaF de la cyclase bien que la filipine produise des modifications structurales de la membrane en complexant le cholestérol. Toutefois, le cholestérol additionné à la préparation membranaire potentialise l'effet du NaF sur la cyclase. Ces résultats suggèrent la possibilité d'une implication des lipides au niveau du site catalytique de l'adénylate cyclase. Le chapitre III s'inscrit dans le cadre d'une étude pour situer le rôle du calcium dans l'activité de l'adénylate cyclase en vérifiant l'effet de la tétracaîne, Celle-ci est une drogue cationique qui compétitionne avec le calcium pour les sites anioniques des phospholipides (PL). L'activité de la cyclase stimulée hormonalement et au NaF est inhibée par la tétracaïne de façon croissante en fonction de la concentration. Le site catalytique est donc influencé par la tétracaïne