El receptor P2X7 contribuye a las corrientes nativas de las neuronas mientéricas de cobayo

Tesis (Doctorado en Ciencias en Biología Molecular)"La configuración de célula completa, varias herramientas farmacológicas y PCR en célula única fueron usadas para investigar la contribución de las subunidad P2X7 en las corrientes inducidas por ATP (IATP) en neuronas mientéricas de cobayo. Las IATP fueron registradas. La curva concentración respuesta para el ATP (0-01-5 mM) mostró dos corrientes, una de alta sensibilidad IATP (IATP(H-S)) observada entre 0-01-0.3 mM y otra de menor sensibilidad IATP (IATP(L-S)) por arriba de 0.3 mM. Los valores calculados de EC50 para estas corrientes fueron 38 y 1759 μM respectivamente. La curva concentración respuesta para el 2’-3’-O-(4- benzoylbenzoyl)-ATP (BzATP) fue monofásica (0-01-1mM) y este agonista fue menos potente (EC50 142 μM) que el ATP para inducir IATP(H-S) pero más potente que el ATP para activar IATP(L-S). Una fuerte rectificación fue observada cuando IATP(L-S) fue activada y para IBzATP (0.1 mM) pero una rectificación mínima fue observada cuando la IATP(L-S) fue activada (5 mM). Brilliant blue G (BBG; 0.3 μM, concentración que inhibe solo a los receptores P2X7) inhibe significantemente las IATP(L-S) pero no afecta a las IATP(H-S) y las IBzATP. Utilizando la técnica de RT-PCR en célula única, el ARNm de P2X7 fue detectado en 7 células de 13 que amplificaban también el ARNm de P2X2. En conjunto nuestros datos muestran que P2X7 es el probable responsable de las IATP(L-S) mientras que en la gran mayoría de las neuronas las IATP(H-S) pueden estar mediadas por, al menos en parte, por las subunidades P2X2.""The whole-cell configuration, various pharmacological tools, and single cell PCR were used to investigate the contribution of P2X7 subunits to the ATP-induced currents (IATP) of guinea pig myenteric neurons. IATP was recorded in tested neurons. ATP concentration-response curve (0.01-5 mM) showed two currents, one high sensitive IATP (IATP(H-S)) observed between 0.01-0.3 mM and another low sensitive IATP (IATP(L-S)) above 0.3 mM. The calculated EC50 values to induce these currents were 38 and 1759 μM, respectively. 2’-3’-O-(4-benzoylbenzoyl)-ATP (BzATP) concentration-response curve was monophasic (0.01-1 mM) and this agonist was less potent (EC50 142 μM) than ATP to induced IATP(H-S) but more potent than ATP to activate IATP(L-S). A strong inward rectification was noticed for IATP(H-S) and for IBzATP (0.1 mM) but a minimal rectification was noticed when IATP(L-S) was activated (5 mM). Brillian blue G (BBG; 0.3 μM, concentration known to inhibit only P2X7 receptors), significantly inhibited IATP(L-S) but neither affect IATP(H-S) nor IBzATP. Using the single-cell RT-PCR technique P2X7 mRNA was detectable in 7 out of 13 (out of 14) myenteric neurons exhibiting P2X2 mRNA. Altogether, our results show that P2X7 is likely responsible for the IATP(L-S), whereas, in the great majority of neurons IATP(H-S) are likely mediated by channels constituted, at least in part, by P2X2 subunits.