Comparison among methods for testing pollen viability

Para o sucesso das hibridações controladas, é importante que o pólen a ser utilizado tenha boa viabilidade (> 30%). Os métodos para testá-la podem ser classificados em quatro tipos: 1- uso de corantes; 2-germinação in vitro; 3- germinação in vivo; 4- porcentagem de frutificação efetiva, obtida com a utilização do pólen em teste. No presente trabalho, realizado em agosto de 2004, fez-se uma comparação entre os três primeiros métodos citados acima, utilizando-se de amostras de pólen de pessegueiro, coletadas em 2003, de cinco cultivares: Esmeralda, Eldorado, Granada, Maciel e Vanguarda. O meio de cultura utilizado para a germinação in vitro foi constituído de 10g de açúcar cristal e 1g de ágar para 100ml de água destilada. Para a germinação in vivo foram emasculadas e polinizadas, em laboratório, flores de ramos coletados no campo e mantidos em frascos com água. Seguiu-se a metodologia utilizada em microscópio de rotina, com corante diferencial a fim de observar os tubos polínicos no estigma ou pistilo. No método de coloração, foi utilizado carmim como corante. Os resultados da análise de variância mostraram que as diferenças entre cultivares, entre métodos e a interação cultivar e método foram altamente significativas. O método de coloração, usando carmin propiônico como corante, foi significativamente superior à germinação in vivo, em todas as cultivares testadas. A germinação in vitro propiciou resultado estatisticamente igual à germinação in vivo, com exceção das cultivares Esmeralda e Granada, nas quais a germinação in vitro foi superior. Entretanto, a maior diferença entre os dois métodos foi de 10,03% na cultivar Esmeralda que, embora estatisticamente significativa, na prática, seria aceitável em testes de rotina. Concluiu-se que o teste in vitro é representativo da situação in vivo, enquanto o método de coloração superestimou a porcentagem de pólen viável.It is important that the pollen used in controlled hibridization has a high germination percentage. There are different ways to test pollen viability: 1. by staining 2-in vitro pollen germination; 3- in vivo germination test; 4-fruit set, obtained by using the pollen to be tested. In the present work, performed in 2004, a comparison was made among the three first methods above. Pollen samples of five cultivars , Esmeralda, Eldorado, Granada, Maciel and Vanguarda ,collected in 2003, were used in the experiment. The culture medium for in vitro germination tests was constituted by 10g of sucrose and 1g of agar dissolved in 100ml of distilled water. Twigs with flowers on balloon stage were collected and taken to the laboratory where they were placed in recipients containing water. The procedure used was the one described for light microscopy using differential dye, in order to observe the pollen tubes on the stigma or in the pistil. Propionic carmin was used as a dye for the staining method of pollen viability evaluation. Variance analysis showed differences among cultivars, among methods and a highly significant interaction between cultivar and method. The staining method using propionic carmin as a dye gave higher percentage of viability than in vivo germination for all the tested cultivars. In vitro germination was statistically equal to in vivo germination , except for cultivars Esmeralda and Granada for which gave higher germination percentages. However, the largest differences between the two methods was 10.03% in cv. Esmeralda, which in spite of being statistically significant, practically would be acceptable for routine tests. It was concluded that in vitro tests using the culture medium is representative of the in vivo situation while the staining procedure was not reliable