Optimization of protocols for in vitro regeneration of 'Cleopatra'(Citrus reshni Hort. ex Tan.) mandarin plants

O sucesso de técnicas biotecnológicas no melhoramento in vitro de citros está condicionado à existência prévia de uma metodologia eficiente de regeneração de plantas. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um sistema para regeneração de plantas in vitro, via organogênese de tangerina Cleópatra (Citrus reshni Hort. Ex Tan.). Experimentos avaliando concentrações de BAP (benzilaminopurina) e condições de cultivo, posição e polaridade do segmento de epicótilo, no meio de cultura, foram desenvolvidos para maximizar a regeneração. Para a indução das brotações, segmentos de epicótilo (1,0 cm de comprimento) foram cultivados em meio de cultura MT (Murashige & Tucker, 1969). Após 45 dias, foram avaliados: percentual de explantes responsivos e nº. de gemas/ explante responsivo. Para enraizamento, foram utilizados os meios MT e MT/2, com ou sem ANA (ácido naftalenoacético) na concentração 1,0 mg L-1. Após 60 dias, avaliou-se o percentual de brotos que emitiram raízes. A máxima proliferação de gemas foi obtida em condições de escuro, por 30 dias, utilizando-se da concentração 2,0 mg L-1 de BAP. Não houve efeito significativo da posição do explante na resposta organogenética. Os segmentos apicais e mediais mostraram-se mais eficientes que os basais. A concentração de 1,0 mg L-1 de BAP com o cultivo em condições de escuro, por 30 dias, na fase de indução de brotações combinada com ausência de auxina no meio MT/2, na fase de indução de raízes, assegurou melhor índice de enraizamento dos brotos regenerados.The success of biotechnology for in vitro citrus plant breeding programs depends on the availability of efficient methodologies for plant regeneration. The objective of this work was to establish a system for regeneration of in vitro plants, through organogenesis of 'Cleopatra' (Citrus reshni Hort. ex Tan.) mandarin plants. Experiments were performed to evaluate the concentration of BAP and culture conditions, position and polarity of the epicotyls segment in culture media to maximize the regeneration of plants. For bud induction, epicotyls segments (1.0 cm of length) were cultivated in MT media, and evaluated after 45 days for % of responsive explants, and number of responsive buds per explants. For rooting, MT and MT/2 media were tested, with and without NAA (1,0 mg L-1). After 60 days, the % of shoots that emitted roots was evaluated. The maximum shoot proliferation was obtained under dark for 30 days, with BAP at 2.0 mg L-1. No effect of explants position in organogenesis response was observed. The apical and medium segments were shown to be more responsive than the basal segments. BAP concentration of 1,0 mg L-1, under dark for 30 days, at shoot induction stage, combined with the lack of auxin in MT/2 media, at the rooting induction stage, assured greater rooting of the regenerated shoots