Bio assays for detection of soybean seeds tolerant to glyphosate herbicide

Esta pesquisa teve por objetivos ajustar as metodologias de bioensaios para detecção de sementes de soja tolerante ao herbicida glifosato, estabelecendo o tempo mínimo necessário para uma avaliação segura, bem como a caracterização dos sintomas causados pelo herbicida nas plântulas não geneticamente modificadas. Foram conduzidos três bioensaios, baseados no teste de germinação. No Ensaio 1, as sementes foram pré-embebidas durante 16 horas em substrato umedecido com solução do herbicida. No Ensaio 2, o substrato foi mantido permanentemente umedecido em solução do herbicida. No Ensaio 3, as sementes foram imersas em solução do herbicida. Os parâmetros de avaliação foram: percentagem e velocidade de germinação, comprimentos da plântula, do hipocótilo e da raiz primária, percentagem de plântulas com raízes secundárias e caracterização morfológica. Concluiu-se que os bioensaios permitem detectar sementes de soja geneticamente modificada, tolerante ao glifosato, no prazo de cinco dias. As metodologias da semeadura em substrato umedecido com solução do herbicida, na concentração de 0,03% da formulação 480 g/L de i.a. e a da pré-embebição das sementes durante 16 horas, com solução contendo 0,4% e 0,6% de glifosato da formulação 480 g/L de i.a. são as recomendadas para utilização em rotina de Laboratório de Análise de Sementes. O glifosato causa anormalidade em plântulas de soja não geneticamente modificada. As plântulas apresentam engrossamento, estrias longitudinais e amarelecimento gradativo do hipocótilo, inibição do desenvolvimento da raiz primária e da emissão de raízes secundárias, sendo o hipocótilo proporcionalmente maior do que a raiz primária.The objective of this study was to adjust methodology to detect soybean seeds tolerant to glyphosate, to characterize the symptoms, to establish the necessary minimum time capable to allow safe and possible evaluation of being reproduced. Three independent assays were done, based on the germination test. In study 1, seeds were pre-imbibed in a substrate containing herbicide solution for 16 hours. In study 2 the substratum was imbibed with the herbicide. In the study 3, seeds were immersed in solution of the herbicide. The standard germination test, speed of germination, length of seedling root and shoot and percentage of seedling secondary roots were used as evaluation parameters. Evaluations were made in the fourth day, until the final count, on the eighth day. All three methods allowed detection of soybean seeds tolerant to the herbicide glyphosate, in the period of five days. The most recommended methodlogies for routine use in seed analysis laboratory were sowing in substratum moistened with solution of the herbicide, at the concentration of 0,03% (480 g/l active ingredient) and pre-imbibing of the seeds for 16 hours, with solution containing 0,4% and 0,6% of glyphosate (480 g/l active ingredient) because they allow germination and the normal development of the aerial parts and root system of genetically modified seedlings. The following symptoms were observed in non GM seedlings : thickened points, longitudinal grooves and with yellowing of the hypocotyl, inhibition of the development of the primary root and of the emission of secondary roots, and the hypocotyl was proportionally larger than the primary root