Técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) no diagnóstico da tuberculose cutânea

Seeking to improve the laboratory diagnosis of Cutaneous Tuberculosis, a study was carried out on the application of PCR technique in macerated, decontaminated(with 4% H2SO4 for elimination of normal microbiot), neutralized (with 4% NaOH)biopsies tissues samples stored at -20ºC. Of the 37 samples submitted for study, 16.22% were positive by microscopy for acid-fast bacilli (concentrated method) and in 43.24% the Mycobacterium tuberculosis was isolated in Löwenstein-Jensen medium. Using a M. tuberculosis complex specific primer set (gene sequence for 16S rDNA), the mycobacterial DNA was detected in 24.32% of the biopsies. The sensitivity and specificity of PCR were 43.7% and 90.4%, respectively. Due to low sensitivity and discrepant results between bacteriological techniques and PCR methodology, the samples were repeated in a new PCR with primers for the IS6110 target. The sensitivity and specificity of PCR for the IS6110 target obtained 100% in comparison with the culture method. The results confirm the effectiveness of PCR methodology using primers for the IS6110 gene sequence and permit the PCR method to be applied to frozen cutaneous biopsies sent by services that do not identify the M. tuberculosis by the biology molecular method.Visando melhorar o diagnóstico laboratorial da Tuberculose Cutânea, foi realizado o estudo da aplicação da técnica de PCR em amostras de tecidos cutâneos macerados, descontaminados (com H2SO4 4% para eliminação da microbiota normal), neutralizados (com NaOH 4%) e armazenadas a -20ºC. Das 37 amostras submetidas ao estudo, 16,22% apresentavam baciloscopias positivas para bacilos álcool-ácidos resistentes (método concentrado) e em 43,24% houve o isolamento do Mycobacterium tuberculosis em meio de cultivo Löwenstein-Jensen. Utilizando-se de primers para a região 16S rDNA do M. tuberculosis, o DNA micobacteriano foi detectado em 24,32% das biópsias. A sensibilidade e especificidade da PCR foram 43,7% e 90,4%, respectivamente. Devido à baixa sensibilidade e resultados divergentes entre as técnicas bacteriológicas e PCR (para a seqüência 16S rDNA), as amostras foram repetidas em um novo PCR com primers para a região IS6110. Tanto a sensibilidade como a especificidade da PCR com primers para IS6110 alcançaram 100% em relação ao cultivo. Os resultados confirmam a eficácia da PCR utilizando primers para a seqüência IS6110 e oferecem a possibilidade da técnica ser aplicada em amostras congeladas enviadas por serviços que não identificam o M. tuberculosis por técnicas de biologia molecular