PCNA/AgNOR double staining technique in adenoid cystic carcinoma

A análise quantitativa das AgNORs e a imunomarcação para o PCNA têm sido empregadas de forma independente na avaliação da proliferação celular de vários tumores, e, em muitos casos, têm mostrado correlação positiva. Entretanto poucos trabalhos têm avaliado, em um mesmo corte histológico, a relação entre PCNA e AgNOR. O objetivo deste trabalho foi otimizar a técnica de dupla marcação com a finalidade de se estudar simultaneamente a correlação entre PCNA e AgNOR no carcinoma adenóide cístico (CAC) de glândulas salivares menores. Foram selecionados 16 casos de CAC classificados de acordo com o subtipo histológico. A análise quantitativa das AgNORs foi feita por meio de análise de imagens. As AgNORs foram contadas em cem núcleos PCNA positivos e em cem núcleos PCNA negativos. O número médio de AgNOR nos núcleos PCNA positivos foi 2,14 ± 0,77, e, nos núcleos PCNA negativos, 1,97 ± 0,79, entretanto esta diferença não se mostrou estatisticamente significante (p = 0,2537). Nosso trabalho não mostrou correlação entre o número de AgNOR e a imunomarcação para o PCNA em CAC quando estes marcadores foram demonstrados simultaneamente através da dupla marcação. Quanto à técnica, o uso do microondas melhorou a coloração da AgNOR, permitindo uma redução no tempo de incubação com a solução de prata e uma melhor individualização das AgNORs, o que facilitou os procedimentos de contagem.No previous studies have simultaneously assessed the relationship between AgNORs and PCNA expression in salivary gland tumors. We describe a method to demonstrate both PCNA and AgNORs in the same slice of routinely processed tissue. We also evaluated the effect of microwaving on the AgNORs reaction. Sixteen cases of adenoid cystic carcinoma (ACC) were selected and the double staining technique was performed in order to quantify the number of AgNORs in PCNA-positive and negative cells. The best results were obtained when AgNOR was performed after the immunostaining. The microwave oven heating improved the AgNORs staining. Our results did not show a statistical difference between the mean number of AgNORs in PCNA-negative and positive cells. There is no association between PCNA and AGNOR in ACC when they are assessed by double-staining