Ativação da Profenoloxidase e Remoção de Bacillus subtilis da Hemolinfa de Acheta domesticus (L.) (Orthoptera: Gryllidae)

Insect phenoloxidase is considered an important mediator in defense reaction against pathogens and parasites. It is present in the hemolymph of most insects as an inactive proenzyme, called prophenoloxidase. In Acheta domesticus (L.) the phenoloxidase activity was studied in the presence of Bacillus subtilis. The bacteria induced the activation of the prophenoloxidase and increased the level of phenoloxidase activity when injected into the hemocoel of A. domesticus nymphs. The level of increase was comparable to those observed in nymphs injected with laminarin, an activator of the proenzyme. Incubating B. subtilis in serum with phenoloxidase activated in vitro and then injecting into the insects accelerated the removal of the bacteria from the hemolymph in vivo. The concentration of bacteria was lower than those observed in nymphs injected with Mes buffer alone. In control insects, injection of soybean trypsin inhibitor lowered phenoloxidase activity and the removal of bacteria from the hemolymph. These results indicate that B. subtilis is sensitive to the prophenoloxidase cascade of A. domesticus. It is suggested that activated phenoloxidase could bind to the surface of bacteria and increase the adhesion of hemocytes to bacteria, and thus accelerating their removal by nodule formation.Fenoloxidase é considerada um importante mediador no sistema de defesa dos insetos contra patógenos e parasitóides. Essa enzima está presente na hemolinfa da maioria dos insetos estudados como uma proenzima inativa chamada profenoloxidase. Em Acheta domesticus (L.) a atividade da enzima foi estudada na presença de Bacillus subtilis. Injeções de bactéria na hemocele de ninfas desse inseto elevaram o nível de atividade da phenoloxidase. A taxa de aumento foi semelhante à observada nos insetos injetados com laminarin, um ativador da proenzima. A incubação de células de B. subtilis em soro com fenoloxidase ativada in vitro, e posterior injeção nos insetos, acelerou a remoção das bactérias da hemolinfa. A concentração das bactérias foi menor do que a observada nas ninfas injetadas apenas com bactéria em solução tampão. Por outro lado, ninfas injetadas com suspensão de bactéria incubada em soro com fenoloxidase inativada in vitro apresentaram alta concentração de bactéria na hemolinfa. Esses resultados indicam que B. subtilis é sensível à cascata de profenoloxidase de A. domesticus. Sugere-se que a fenoloxidase ativada adere à superfície das bactérias e aumenta a fixação dos hemócitos em torno das bactérias. Isso contribui para acelerar sua remoção da hemolinfa através da formação de nódulos