Produção de xilanase pelo Trichoderma harzianum rifai por fermentação em fase sólida em bagaço de cana de açúcar

Sugarcane bagasse was used as substrate for xylanase production by means of a strain of Trichoderma harzianum Rifai isolated from decaying Aspidosperma sp. (peroba) wood. The bagasse was washed, dried, milled and wetted with minimal salts medium and the cultures grown at 28 ± 2ºC for 7 days. Two extraction methods were tested for enzyme recovery: (A) Tween 80, 0.1% (v/v), in physiological saline, and (B) 50mM sodium acetate buffer, pH 5.0, under agitation (180rpm) for 15, 30 and 60min. After a single extraction, both extraction methods recovered an average of 15U/ml of xylanase activity, independent on the time of shaking. A second and third extraction recovered 10.4 and 6.6U/ml xylanase, respectively. The effect of volume size for extraction, and sugarcane bagasse concentration, on xylanase production were also investigated. The growth profile of Trichoderma harzianum was followed over 20 days on 14% (w/v) bagasse, and highest xylanase activity (288U/ml) appeared on the seventh day. The enzymatic extract after precipitation with ammonium sulphate was submitted to electrophoresis on polyacrylamide gels and showed 4 protein-staining bands, one of which exhibited xylanase activity.Bagaço de cana-de-açúcar foi utilizado como substrato para a produção de xilanase pelo Trichoderma harzianum Rifai, isolado previamente de peroba (Aspidosperma sp) em decomposição. Após ter sido lavado, seco e moído, o bagaço foi umedecido com meio mínimo de Vogel e autoclavado. Dois métodos de extração foram avaliados para recuperação da enzima: (A) Tween 80 0,1% em salina fisiológica (v/v) e (B) tampão acetato pH 5 (50mM) sob agitação (180rpm) durante 15, 30 e 60 minutos. Em média, foram recuperados 15U/ml de atividade xilanásica com ambos os extratores, após uma única extração, independente do tempo de agitação. Uma segunda e terceira reextrações recuperaram 10,4 e 6,6U/ml, respectivamente. O efeito de diferentes volumes de extração e a concentração de bagaço de cana para a produção da xilanase também foram investigados. A curva de crescimento de Trichoderma harzianum foi avaliada durante 20 dias e a maior atividade xilanásica (288U/ml) foi obtida no sétimo dia de cultivo. O extrato enzimático, após precipitação com sulfato de amônio, foi submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida e apresentou 4 bandas de proteína, das quais apenas uma demonstrou atividade xilanásica