Diagnóstico sorológico da toxocaríase através do método de ELISA indireto de competição

Toxocariasis is caused by infection of man by Toxocara canis and Toxocara cati larvae, the common roundworm of dogs and cats. Because larvae are difficult to detect in tissues, diagnosis is mostly based on serology. Non specific reactions are observed mainly due to cross-reactivity with Ascaris sp antigens. This investigation aimed at developing and evaluating an indirect antibody competition ELISA (IACE) employing a specific rabbit IgG anti-Toxocara canis excretory-secretory antigens as the competition antibody, in order to improve indirect ELISA specificity performed for toxocariasis diagnosis. For that, the rabbit IgG was previously absorbed by Ascaris suum adult antigens. Sensitivity and specificity of IACE were first evaluated in 28 serum samples of mice experimentally infected with T. canis embryonated eggs. Adopting cut-off value established in this population before infection, sensitivity and specificity were 100% after 20 days post-inoculation. For human population IACE was evaluated using sera from 440 patients with clinical signs of toxocariasis and the cut-off value was established with 60 serum samples from apparently healthy individuals. Using as reference test the indirect ELISA performed by Adolfo Lutz Institute, sensitivity was 60.2%, specificity was 98% and concordance was 77.3%. Repeatability of IACE was evaluated by the inter-reactions variation coefficient (2.4%).A toxocaríase, uma emergente zoonose, é uma síndrome clínica decorrente da infecção humana por larvas de Toxocara canis e Toxocara cati, parasitas intestinais de cães e gatos, respectivamente. A dificuldade de detecção das larvas nos tecidos e a inespecificidade dos sinais clínicos tornam os testes sorológicos os meios diagnósticos mais adequados. Os antígenos excretores-secretores de T. canis empregados nos testes sorológicos, embora tenham contribuído para melhorar a especificidade destes, apresentam reações cruzadas com diversos parasitas, particularmente com Ascaris sp. Com o intuito de aumentar a especificidade do diagnóstico sorológico da toxocaríase que rotineiramente é feito através do método de ELISA indireto, no presente trabalho desenvolveu-se um método de ELISA indireto de competição (EIC), utilizando IgG anti-TES produzida em coelhos e absorvida com um polímero de extrato antigênico de adultos de A. suum. A avaliação da sensibilidade e especificidade do EIC proposto foi inicialmente feita em camundongos experimentalmente infectados com T. canis. Adotando-se ponto de corte estabelecido nesta população previamente à infecção, os valores de sensibilidade e especificidade foram de 100% a partir de 20 dias pós-inoculação. Para a população humana, adotou-se um ponto de corte estabelecido a partir de 60 amostras de soro de indivíduos saudáveis e sem suspeita clínica de LMV. A avaliação do EIC foi realizada em amostras de soro de pacientes com suspeita clínica da doença e tomando como referência a classificação previamente feita pelo ELISA indireto realizado pelo Instituto Adolfo Lutz-SP. O EIC apresentou valores de sensibilidade relativa de 60,2 %, especificidade relativa de 98% e concordância de 77,3%. Na avaliação da repetibilidade do EIC obteve-se coeficiente de variação inter-reações de 2,4%