EXPRESSION OF SIGMA 1 RECEPTORS IN DIABETIC RATS

Sigma receptori su izvorno otkriveni u živčanom sustavu, ali ih nalazimo i u različitim drugim tkivima, uključujući bubreg. Dosadašnja istraživanja ukazuju na renoprotektivno djelovanje σ1R koje je većinom posredovano modulacijom signalnog puta dušikovog oksida. S obzirom na važnost ovog signalnog puta u patogenezi dijabetičke nefropatije za pretpostaviti je da i σ1R imaju važnu ulogu u patogenezi ovoga stanja. Svrha istraživanja je bila utvrditi promjene izražaja σ1R u bubrezima, koje bi posredno ukazivale na njihovu eventualnu ulogu u patogenezi dijabetičke nefropatije. Istraživanje je provedeno na Sprague Dawley štakorima. Model šećerne bolesti tipa 1 izazvan je injekcijom streptozotocin (55 mg/kg). U pokus su uključeni štakori kojima je 4. dan nakon indukcije šećerne bolesti izmjerena koncentracija glukoze u krvi >16.5 mmol/L. Nakon 2 tjedna odnosno 2 mjeseca životinje su eutanazirane te je uzet uzorak tkiva bubrega. Tkivo je pripremljeno te su napravljeni parafinski rezovi, te obojeni imunofluorescencijski i histološkom tehnikom PAS. Obojeni rezovi fotografirani su te su dobivene mikrofotografije analizirane korištenjem ImageJ. Za statističku analizu korištena je jednosmjerna analiza varijance (ANOVA) i Tukey-ev test za višestruke usporedbe (GraphPad Software, La Jolla, CA, SAD). Kod dijabetične skupine štakora 2 mjeseca nakon injekcije STZ-a vidljive su patološke promjene u bubregu. Te promjene su: ekspanzija mezangija, tubularna skleroza, nakupljanje hijalinog materijala u stijenkama krvnih žila i vakuolizacije stanica distalnih tubula. Analiziran je broj σ1R imunoreaktivnih distalnih tubula i uočeno da u kontrolnim skupinama broj pozitivnih distalnih tubula opada s vremenom, dok u dijabetičnim skupinama raste (oba P16.5 mmol/L on the 4th day following the induction of diabetes were included in the experiment. The animals were sacrificed 2 weeks or 2 months after diabetes induction and a kidney tissue sample was harvested. The tissue was embedded in paraffin and 5 µm thick section were made, and stained with histological technique PAS and immunofluorescence method. Stained sections were photographed, and the resulting images were analyzed using ImageJ. For statistical analysis, a one-way variance analysis (ANOVA) and a Tukey test for multiple comparisons were used (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). In the kidney of the diabetic group of rats 2 months after injection of STZ, pathological changes characteristic for diabetes nephropathy were apperent, including: the expansion of mesangium, tubular sclerosis, the accumulation of hyaline material in the walls of the blood vessels and the vacuolization of distal tubule cells. The number of σ1R immunoreactive distal tubules in the control gruops decreased with time, while in diabetic groups it increased (both P<0.001). The number of immunoreactive tubules was significantly lower in the diabetic group 2 weeks after STZ injection when compared to the corresponding control group (P<0.01); while the number of σ1R positive tubules was significantly higher in the diabetic group 2 months after the induction of diabetes in comparison to the corresponding control group (P<0.001). The area of σ1R immunoreactivity was significantly higher in the diabetic group 2 months after the induction of diabetes compared to the control group, but also in comparison with the diabetic group 2 weeks after the induction of diabetes (both P