Regulatorni zahtjevi u ispitivanju virusnih onečišćenja u proizvodnji cjepiva

CILJ ISTRAŽIVANJA Cilj ovog specijalističkog rada je pregledno opisati regulatorne zahtjeve koji su propisani s ciljem osiguravanja cjepiva od virusnih onečišćenja, a što značajno određuje kakvoću i sigurnost primjene cjepiva. Prikazat će se konvencionalne metode detekcije virusa kao stranih agensa u cjepivima te usporediti sa suvremenim metodama. Također će se opisati razvoj suvremenih metoda za detekciju potencijalnih virusnih onečišćenja. MATERIJAL I METODE Metoda istraživanja teorijskog rada temelji se na pretraživanju literature elektroničkim putem. Pretražene su bibliografska baza podataka (PubMed) i baza podataka s cjelovitim tekstom (Science Direct). Literatura je pretražena prema temi istraživanja, predmetu istraživanja i časopisu. Informacije o odobrenim cjepivima prikupljene su pretraživanjem raspoloživih online baza podataka Agencije za lijekove i medicinske proizvode (HALMED), Europske agencije za lijekove (EMA) i Američke agencije za hranu i lijekove (FDA). Pretraživnjem mrežnih stranica HALMED-a, EMA-e i FDA-a te Svjetske zdravstvene organizacije (SZO) i Međunarodne konferencije o harmonizaciji (ICH) dobiven je uvid u regulatorne smjernice vezane uz cjepiva. Prikupljeni podaci su kritički sagledani te sveobuhvatno prikazani kao pregledni rad kako bi se prikazala važnost primjene zakonskih okvira s ciljem osiguravanja cjepiva od onečišćenja stranim agensima. REZULTATI Cjepiva su imunološki lijekovi za aktivnu imunizaciju protiv patogenih mikroba (virusa, bakterija i parazita), a dobivaju se od živih (oslabljenih) ili mrtvih mikroba, njihovih toksina ili izdvojenih antigenih komponenti. U razvoju i proizvodnji cjepiva koriste se biološki materijali životinjskog ili ljudskog podrijetla, kao što su kulture stanica koji se koriste za proizvodnju antigena ili fetalni teleći serum koji se koristi za uzgoj kultura stanica. Onečišćenje se može dogoditi u različitim koracima postupka proizvodnje, uključujući polazni materijal (matične i radne banke stanica), sam postupak proizvodnje antigena i postupak oblikovanja gotovog proizvoda. Kako bi prilikom proizvodnje i kontrole kvalitete u proizvodnji virusnih cjepiva/bioloških lijekova osigurali odsutnost stranih agensa znanstveno regulatorne smjernice propisuju in vivo i in vitro testove na prisutnost stranih agensa (virusa). Uzimajući u obzir unaprjeđenje postojećih i razvoj novih metodologija za detekciju virusa, proširuju se i spoznaje o „novim“ potencijalnim stranim agensima-virusima u cjepivima što zahtjeva usklađivanje postojećih zahtjeva koji se odnose na virusnu čistoću u svrhu osiguravanja kvalitete i sigurnosti cjepiva. Osnova samog zahtjeva za virusnu čistoću cjepiva jest ta da se nastoje popisati svi strani agensi-virusi koji bi se morali testirati te opisati testove (metode) kojima bi se popisani agensi mogli detektirati. ZAKLJUČAK U Republici Hrvatskoj sva cjepiva u prometu su odobrena nacionolanim postupkom, međusobnog priznavanja/decentraliziranim postupkom i centraliziranim postupkom davanja odobrenja. Regulatorni zahtjevi koji su propisani s ciljem osiguravanja cjepiva od onečišćenja stranim agensima-virusima nalaze se u smjernicama regulatornih tijela kao što su EMA, i FDA te organizacije kao što je Svjetska zdravstvena organizacija i smjernicama Međunarodne konferencije o harmonizaciji te u Europskoj i Američkoj farmakopeji. Konvencionalne metode ispitivanja u uvjetima in vitro i in vivo uključuju in vitro testove na staničnim kulturama i in vivo testove na okoćenim miševima, odraslim miševima, zamorcima, kunićima i pilećim embrijima. Prednost nad konvencionalnim pristupom detekcije stranih agensa-virusa imaju molekularno-biološke metode, temeljene na PCR-u koje su osjetjivije i brže, a k tome treba pridodati razvoj bioanalitičkih metoda temeljenih na masenoj spektrometriji koje u kombinaciji s PCR-om pokazuju visoku osjetljivost, široki spektar, točnost, veću brzinu kao i mogućnosti automatizacije procesa.OBJECTIVES The objective of this paper is to give general description of the characteristics of the vaccine with emphasis on the production of viral vaccines. The aim of this thesis is also to review the regulatory requirements related to viral safety and extraneous agents testing of vaccines which significantly determines vaccines quality and safety. This thesis will describe and compare the conventional and novel methods for extraneous agents testing of vaccines. MATERIAL AND METHODS The method of research of these theoretical paper was based on the search of literature that was conducted electronically, by searching the bibliographic database (PubMed) and the full text database (Science Direct). The literature was searched by the research topic, research subject, authors and journal. The literature was researched from the general articles to the specialised articles. Using available online databases of the Agency for Medicinal Products and Drugs (HALMED), the European Medicines Agency (EMA), the American Food and Drug Administration (FDA), the World Health Organization (WHO), the International Conference on Harmonization (ICH) has had provided a review of guidelines and regulations wich are related to viral safety and extraneous agents testing of vaccine. RESULTS Vaccines are immune medications that provides active immunization against pathogenic microbes (viruses, bacteria and parasites), and are derived from live (weakened) or dead microbes, their toxins or isolated antigenic components. Vaccine development and production are profoundly linked to the use of biological material of animal or human origin, such as cell cultures obtained from various sources and foetal calf serum used for growing the cells. The use of such biological material in vaccine develpment and production may lead to potential contaminations of the vaccine products. The contamination may happen in various steps of the manufacture procedure including the starting materials (master and working seed viruses) and the final formulation of drug product. In order to ensure the absence of adventitious virus agents in the production of viral vaccines / biological drugs, scientifically regulative guidelines prescribe in vivo and in vitro assays for the presence of foreign agents (viruses). Considering the improvement of existing and developing new methods for the detection of viruses, knowledge on "new" potential adventitious agents (viruses) in vaccines has been expanded, which requires alignment of existing requirements related to viral purity to ensure the quality and safety of the vaccine. The basis for the requirement for viral purity of the vaccine is to try to list all the adventitious agents /viruses that need to be tested and to describe the assays (methods) for their detection. CONCLUSION In Republic of Croatia all vaccines are approved by national procedures, mutual recognition / decentralized procedure and the centralized procedure. Regulatory requirements prescribed for the purpose of providing vaccine against foreign viruses are contained in the guidelines of regulatory bodies such as EMA, FDA and organizations such as the World Health Organization and the guidelines of the International Conference on Harmonization and the European and American Pharmacopoeia. Conventional test methods in vitro and in vivo assays include in vitro tests on cell cultures and in vivo tests on mice, adult mice, guinea pigs, rabbits and chicken embryo cells. The advantage over the conventional approach of detection of adventitious agents-viruses have a molecular-biological methods based on PCR that proved to be more sensitively and faster, and should also be added the development of bio-analytical methods based on mass spectrometry, which in combination with PCRs show high sensitivity, broad spectrum, accuracy, higher speed and possibility of process automation