ODREĐIVANJE HER2 STATUSA U INVAZIVNIM KARCINOMIMA DOJKE

HER2 je stanični membranski receptor za humani epidermalni čimbenik rasta, kojeg kodira gen koji se naziva HER2/neu gen. Vezanjem humanog epidermalnog čimbenika rasta na HER2 receptor aktiviraju se stanični putevi koji reguliraju dijeljenje i rast stanice. U karcinomima dojke neki karcinomi imaju povećan broj HER2 receptora kao posljedicu genske amplifikacije tj. većeg broja kopija HER2 gena. Takav status je povezan s agresivnijim biološkim ponašanjem i lošijom prognozom. Karcinomi s povećanim brojem HER2 receptora nazivaju se HER2 pozitivni karcinomi. Pronalaskom biološke terapije Trastuzumabom, monoklonalnim protutijelom koje se veže na HER2 receptore, čime se spriječava dijeljenje i rast tumorske stanice, omogućena je specifična terapija za HER2 pozitivne karcinome. Stoga je nužno u rutinskoj dijagnostici karcinoma dojke odrediti HER2 status karcinoma. To se može napraviti ili imunohistokemijskom metodom otkrivanja količine receptora na staničnoj membrani monoklonalnim protutijelom ili in situ hibridizacijom, odnosno određivanjem broja HER2/neu gena u stanici, lokalizacijom DNA sekvenci na kromosomima. Imunohistokemija je histološka tehnika lokalizacije specifičnih antigena pomoću ciljano usmjerenih protutijela, koristeći osnovni princip u imunologiji da se određeno protutijelo veže i prepoznaje samo ciljni antigen. Pozitivnu ekspresiju HER2 antigena (3+) karakterizira smećkasto obojenje membrane. Intenzitet reakcije označen kao 2+ je dvojben, može odgovarati povećanom broju receptora, ali može biti i posljedica nespecifičnog vezanja antitijela pa uzorak dodatno analiziramo CISH metodom. Nalaz 1+ ili 0 u kojima nema obojenja stanične membrane ili je ono izrazito slabo, znači da ne postoji povećana ekspresija HER2 antigena na staničnoj membrani. In situ hibridizacija je tehnika koja omogućava detekciju specifičnih ciljnih sekvenci unutar DNA uz istovremeno očuvanje stanične i tkivne morfologije. U ovom radu korištena je kromogena in situ hibridizacija (CISH), gdje su se ciljne sekvence označile bojom. HER-2/neu rezultate CISH metode očitavamo metodom skoriranja na temelju broja i izgleda signala, obzirom na to ima li ili nema amplifikacije. Nakon provedenog istraživanja, u uzorcima u kojima imunohistokemijski nije bilo ekspresije HER2 nije nađena niti amplifikacija in situ hibridizacijom. Svi nalazi 3+ bili su jako amplificirani izuzev jednog uzorka koji je bio slabo amplificiran. Dva slučaja od ukupno četiri slučaja koja su IHC metodom skorirani 1+ možda su preslabo ocjenjeni pri očitanju imunohistokemijske reakcije jer je CISH metodom nađena slaba amplifikacija. U četiri uzoraka smo IHC metodom dobili rezultat 2+. Daljnjom analizom CISH metodom dva uzorka su ocjenjena slabo amplificiranim, jedan je ocjenjen jako amplificiranim, a u jednom nije nađena amplifikacija