EBウイルスリボ核酸EBERsによる上咽頭癌発癌機構の分子生物学的解析

Epstein-Barrウイルス(EBV)がコードする小RNAEBERsの発現ベクターを作成した。すなわち、EBER1、EBER2各遺伝子を各々1コピー、4コピー、10コピー直列につないでpcDNA3プラスミドに挿入した。それらを正常腎上皮細胞MDCKに形質導入し、形質転換能および増殖能を検討したところ、EBER1とEBER2を各々4コピーずつ含むプラスミドを導入した場合、軟寒天培地におけるコロニーの形成能が最も亢進した(コントロールの4倍)。EBER1とEBER2を各々10コピーずつ含むプラスミドを導入した場合のコロニー形成能は、コントロールの1.8倍、EBER1およびEBER2を各々単独で導入した場合にはコントロールと比較して、有意なコロニー形成能の亢進は認められなかった。次に、無血清培地におけるMDCK細胞の増殖能を指標としてEBERsの形質転換能を評価した。結果は、各々のコピー数のEBER1+EBER2の組み合わせのいずれにおいても有意な増殖能の変化を認めなかった。また、放射線および紫外線に対する感受性も、同様に変化を認めなかった。EBERsは核内で二本鎖RNAを形成してプロテインキナーゼR(PKR)を阻害して細胞の増殖能を促進することが示唆されている。EBERsを試験管内で合成し、MDCK細胞のリボゾームRNAをコントロールとしてPKR活性にEBERsが及ぼす影響を検討した。すなわち、PKRが燐酸化することが判明しているアミノ酸配列ILLSESRRRIRの中央のセリンと放射性同位元素γ32Pを用いてEBERsによるPKR酵素活性を評価したところ、EBERsはPKR活性に影響しないという結果を得た。上咽頭がん組織におけるEBERsの発現とEBVがん遺伝子LMP1の発現と各種臨床パラメーターとの相関を検討したところ、EBERsの発現はTstageが進行するにつれ増加する傾向にあったが統計学的に有意ではなかった。一方LMP1の発現は頸部リンパ節転移と有意に相関した。以上より、EBERs発現はMDCK細胞のanchor independentな増殖を促進するが、その現象にはPKR以外のシグナル伝達系が関与すること、EBERsは転移より増殖に関連が深いことが示唆された。EBERs is composed of EBER1 and EBER2. Transfection of EBER1+EBER2 expression vector in MDCK cell enhanced colony formation in soft agar, indicating that expression of EBERs transformed MDCK cell to potentially malignant, anchor-independent phenotype. Either EBER1 or EBER2 expression alone was not sufficient for transformation of MDCK cell to this anchor-independent character. EBERs did not protect MDCK cells from dell death in the condition of serum starvation and irradiation. EBERs are known to activates protein kinase R(PKR) which is activated by double-strand RNA. However, our in vitro kination assay revealed that EBERs did not activate PKR in MDCK cells. These results suggest that transformation of MDCK by EBERs were mediated by alternative pathway rather than PKR pathway. Expression of EBERs in nasopharyngeal carcinoma tissue tended to be correlated with advanced T stage, suggesting that EBERs promote growth and proliferation of tumor cell in nasopharyngeal carcinoma.研究課題/領域番号:13671775, 研究期間(年度):2001-2002出典：「EBウイルスリボ核酸EBERsによる上咽頭癌発癌機構の分子生物学的解析」研究成果報告書 課題番号13671775 (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作