Alterations of FADD expression and phosphorylation in T-cell lymphoblastic lymphoma

Tesis doctoral inédita leida en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 15-02-2019Esta tesis tiene embargado el acceso al texto completo hasta el 15-08-2021T-cell lymphoblastic neoplasms are aggressive haematological malignancies which mainly develop in children but can also affect adults. The molecular basis of T-cell lymphoblastic lymphoma is not fully understood. In consequence, there is a lack of robust and reliable prognostic markers, thus hindering the achievement of better results in the clinic. The role of FADD in cancer is controversial, probably due to its dual role in apoptosis and other non-apoptotic functions such as proliferation and cell cycle control. Moreover, it seems that these non-canonical functions depend on FADD phosphorylation and subcellular location. Despite FADD having a relevant role in T cells, alterations affecting its expression and phosphorylation are not completely unveiled in haematological cancers. In the present work, we show that T-cell lymphoblastic lymphoma cells exhibit a significant reduction of FADD, both in mouse and human. The proteomic approach indicates that FADD reduction in tumour T cells impacts on mitochondrial processes as well as in the regulation of messenger RNA processing and maturation. However, apoptosis impairment due to FADD reduction is probably the main FADD-mediated oncogenic event in T-LBL tumour cells. Nevertheless, the phosphorylation status of the remaining FADD protein is capable of shaping its non-apoptotic functions. Phosphorylated FADD is significantly reduced as well in T-cell lymphoblastic lymphoma. Even though, phosphorylated FADD is more stable and more prone to be nuclear. There, it would be prevented from participating in death receptorsmediated apoptosis and it would favour tumour cell proliferation. Interestingly, we have determined that the level of FADD phosphorylation can provide the basis for patient stratification. Higher levels of phosphorylated FADD in the tumour significantly correlate with shorter survival times in mice and with worse clinical prognosis in human patients. This supports that FADD phosphorylation status may serve as a predictor for aggressiveness and tumour outcome. In summary, we propose FADD phosphorylation as a new biomarker with prognostic value in T-cell lymphoblastic lymphoma.Las neoplasias linfoblásticas de células T son neoplasias hematológicas agresivas que se desarrollan principalmente en niños pero también pueden afectar a adultos. La base molecular del linfoma linfoblástico de células T no es del todo conocida. Por ello, carecemos de marcadores de pronóstico robustos y fiables, lo cual impide alcanzar mejores resultados en la clínica. El papel de FADD en cáncer es controvertido, probablemente debido a su función dual en la apoptosis y en funciones no apoptóticas como la proliferación o el control del ciclo celular. Además, parece que estas funciones no canónicas dependen de la fosforilación y la localización subcelular de FADD. Aunque FADD tiene un papel importante en las células T, las alteraciones que afectan a su expresión y su fosforilación no se han desvelado completamente en los tumores hematológicos. En este trabajo, mostramos que los linfomas linfoblásticos de células T presentan una reducción significativa de FADD, tanto en tumores humanos como de ratón. Nuestra aproximación proteómica indica que la reducción de FADD en células T tumorales tiene impacto sobre procesos mitocondriales, así como sobre la regulación del procesamiento y la maduración del ARN mensajero. Sin embargo, la disfunción de la apoptosis es probablemente el principal evento oncogénico mediado por FADD en la célula tumoral. Por otro lado, el estatus de fosforilación de la proteína FADD que queda en la célula tumoral es capaz de modular sus funciones no apoptóticas. Encontramos que la forma fosforilada de FADD también está significativamente reducida en el linfoma linfoblástico de células T. Aunque, la forma fosforilada es más estable y con mayor tendencia a localizarse en el núcleo, donde quedaría apartada de su participación en la apoptosis mediada por receptores de muerte y además favorecería la proliferación de la célula tumoral. Observamos con gran interés que el nivel de fosforilación de FADD sirve de base para la estratificación de los pacientes de linfoma linfoblástico de células T. Los niveles más altos de FADD fosforilado en el tumor se relacionan con tiempos de supervivencia significativamente más cortos en ratones y con peor pronóstico clínico en el ser humano. Estos hechos apoyan que el estatus de fosforilación de FADD puede servir para predecir la agresividad y la resolución del tumor. En resumen, proponemos la fosforilación de FADD como un nuevo biomarcador con valor pronóstico en el linfoma linfoblástico de células T.This work was supported by grants from the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (SAF2012-36566 and SAF2015-70561 MINECO/FEDER, UE; BES-2013- 065740), the Autonomous Community of Madrid, Spain (Oncocycle S2011/BMD-2470 and B2017/BMD-3778; LINFOMAS-CM), the Spanish Association Against Cancer (AECC, 2018; PROYE1805PIRI) and the Carlos III Health Instutite (ISCIII) (ACCI-CIBERER-17). Institutional grants from the Fundación Ramón Areces and Banco de Santander to the CBMSO are also acknowledged