Variações da técnica DDRT-PCR para análise da expressão gênica diferencial em amostras de câncer de mama

Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)O câncer de mama é uma das principais causas da morte em mulheres, sendo que apenas 5 a 10% dos casos são hereditários. Devido à natureza multigênica do câncer e a grande influência ambiental nos casos esporádicos, é de importância fundamental o diagnóstico precoce para a obtenção do sucesso terapêutico. Neste contexto, embora muitos marcadores moleculares tenham sido descritos, as informações levam, em sua maioria, para genes de ocorrência tardia. Com o intuito de isolar novos marcadores moleculares, duas variações metodológicas do DDRT-PCR para análise da expressão gênica em tecidos tumorais e normais foram comparadas, sendo uma das técnicas a metodologia convencional que usa entre os iniciadores uma sequência obrigatória oligo (dT) durante a transição reversa seguida pela PCR com um iniciador randômico. A outra metodologia usa apenas iniciadores arbitrários. Os amplicons gerados foram visualizados em gel de poliacrilamida corados por nitrato de prata. Resultados revelaram que a metodologia convencional apresentou um menor número de bandas com maior resolução do que as obtidas pela amplificação randômica, mas esta última, evita que somente sejam realizadas amplificações de cDNAs correspondentes à porção 3'