O avanço da idade induz alterações na organização da cromatina e na ploidia de neurônios corticais de camundongos

Aging is a process inherent to all living beings and constitutes a major risk factor for several degenerative and chronic diseases. It is characterized by a series of cellular alterations which lead to impaired normal tissue function with loss of its regenerative capacity. In this context, chromatin organization plays a major role in the mechanisms of aging, because it regulates gene expression, repair of macromolecules, and accessibility of genotoxic agents to DNA. Epigenetic mechanisms, such as DNA methylation and histone post-translational modifications (PTMs) are the main regulators of chromatin structure. Previous studies have described alterations on chromatin organization and epigenetic marks along aging. Thus, the knowledgement of the association between chromatin structure and aging is fundamental for the development of treatments that would increase life quality on the elderly population and delay or prevent the onset of several age-associated disorders, such as cancer, Alzheimer s disease and others. In this context, the objective of this work was to evaluate the structural and epigenetic alterations of nuclei of cortical neurons from mice with the advancing of age. To this end, isolated neuronal nuclei were Feulgen-stained, followed by image analysis to evaluate chromatin organization (analyzed also by enzymatic digestion kinetics with nuclease) and DNA content (analyzed also by flow cytometry), in addition to biochemical assays (SDS-PAGE and westernblotting) to quantify epigenetic marks. Results indicate significant alterations on chromatin organization of cortical neurons from mice with advancing age, whose fibers seem to undergo unpackaging, as well as increased levels of the epigenetic mark H3K9Ac, which is associated with unpackaged chromatin. Additionally, there is evidence that neurons undergo polyploidy, according to previous data on hepatocytes, being this polyploidy increased with increasing age. Since increased transcriptional activity is not characteristic of aged cells, the decreased chromatin packaging state may be correlated with impaired genome stability, along with activation of repair mechanisms triggered by the accumulation of DNA damage during life span, which is characteristic of aged cells.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorMestre em Biologia Celular e Estrutural AplicadasO envelhecimento é um processo inerente a todos os seres vivos e constitui um dos principais fatores de risco para várias doenças crônico-degenerativas. Ele se caracteriza por uma série de alterações celulares que levam ao comprometimento da função normal dos tecidos, com perda de sua capacidade regenerativa. Neste contexto, a organização estrutural da cromatina possui um papel central nos mecanismos envolvidos no envelhecimento, pois ela regula a expressão gênica, mecanismos de reparo de macromoléculas e a susceptibilidade do DNA a agentes genotóxicos. Mecanismos epigenéticos, como metilação de DNA e modificações pós-traducionais de histonas são os principais reguladores da organização da cromatina. Estudos anteriores descrevem alterações na organização da cromatina com o envelhecimento. Dessa forma, o entendimento da associação entre estrutura cromatínica e envelhecimento é fundamental para o desenvolvimento de tratamentos que possam melhorar a qualidade de vida da população idosa e retardar ou evitar doenças crônicas relacionadas à idade, como câncer, mal de Alzheimer e outras. Nesse sentido, este trabalho objetivou avaliar as alterações estruturais e epigenéticas em núcleos de neurônios corticais de camundongos com o avanço da idade. Para tanto, núcleos isolados de neurônios foram submetidos à Reação de Feulgen seguida de análise de imagem para avaliação da organização da cromatina (analisada também por cinética de degradação com nuclease) e conteúdo de DNA (este último analisado também por citometria de fluxo), além de ensaios bioquímicos (SDS-PAGE e western blotting) para quantificação de marcadores epigenéticos. Os resultados indicam alterações significativas na organização da cromatina dos núcleos de neurônios com o avanço da idade, cujas fibras sofrem descompactação, além de aumento do marcador epigenético H3K9Ac, o qual está associado com cromatina descompacta. Adicionalmente, há indícios de que neurônios apresentam poliploidia, confirmando dados prévios da literatura e, semelhantemente ao que já foi relatado em estudos anteriores para fígado, essa poliploidia aumenta com a idade. Como o aumento da taxa de transcrição não é característico de células senis, o aumento na descompactação deve-se provavelmente a um aumento de instabilidade genômica e alteração da organização cromatínica de células em animais mais velhos