Construção de uma biblioteca de anticorpos recombinantes (FAB) anti-carcinoma mamário e obtenção de fragmentos ligantes de antígenos tumorais por phage display

Breast carcinoma (BC) is currently regarded as a complex and heterogeneous disease presenting abnormalities in several molecular pathways. Although BC is the leading female cancer in incidence and the second one in mortality worldwide, the prognostic and predictive factors known are incapable to predict the outcome of all patients as well as to avoid unnecessary treatment. Applicability of Phage Display technology allows the construction of antibody combinatorial libraries identifying human monoclonal antibodies to clinical and therapeutic practice. In this work was constructed a recombinant Fab library which aimed recognized tumor antigens in patients with breast cancer. Transcripts from twenty patients with diagnosed invasive ductal carcinoma were used to construct a library with 1,7x106 different clones, which was selected against breast tissues. ELISA assays demonstrated reactivity of 22 clones, of which was selected the one with the biggest difference between the study groups. Imunohistochemistry experiments confirmed the specificity of FabC-4 clone to tumor antigens. This work provided significant biotechnological results with a specific Fab recombinant library, which indicated its great potential in selecting antibodies for breast carcinoma, opening new possibilities in diagnostic and therapeutics areas.Mestre em Genética e BioquímicaO Câncer de Mama é o câncer mais comumente diagnosticado em mulheres e a segunda causa de morte por doença maligna após o câncer de pulmão. Grande parte dos casos letais da doença é conseqüente de um diagnóstico tardio e, apesar das inúmeras conseqüências biológicas e psicológicas encontradas, os marcadores preditivos e diagnósticos até então disponíveis ainda são incapazes de definir todas as pacientes e de evitar tratamentos desnecessários. Nesse sentido, a apresentação de anticorpos na superfície de fagos filamentosos tem se mostrado como uma ferramenta eficiente na descoberta e desenvolvimento de anticorpos monoclonais com aplicação terapêutica. Diversos fragmentos de anticorpos já foram aprovados ou estão em validação clínica, de modo que a engenharia de anticorpos vem se apresentando como uma tecnologia promissora, explorando diversos mecanismos na busca de marcadores terapêuticos. Essa revisão visa descrever alguns aspectos do Câncer de Mama assim como explicitar o mecanismo de ação dos anticorpos e seus fragmentos na busca de alvos clínicos e descrever a tecnologia de Phage Display, a mais amplamente utilizada na construção e seleção de bibliotecas combinatoriais de anticorpos. O Câncer de Mama (CM) é, atualmente, considerado uma doença complexa e heterogênea apresentando anormalidades em diversas vias moleculares. Embora o CM seja líder em incidência de tumores entre mulheres e a segunda causa de mortalidade no mundo, os fatores prognósticos atuais são incapazes de predizer a evolução da totalidade das pacientes e qual o tratamento adequado. A metodologia de Phage Display permite a construção de bibliotecas combinatoriais de anticorpos monoclonais, o que viabiliza a identificação de anticorpos monoclonais humanos voltados à prática clínica e terapêutica. No presente trabalho foi construída uma biblioteca recombinante tipo Fab com o objetivo de reconhecer antígenos tumorais específicos em pacientes com câncer de mama. A partir dos transcritos de vinte pacientes com carcinoma ductal infiltrante foi construída uma biblioteca com diversidade de 1,7x106 clones diferentes, a qual foi selecionada contra tecidos mamários. Os ensaios de ELISA demonstraram a reatividade de 22 clones, dos quais foi escolhido aquele com maior diferença de reatividade entre os grupos de estudo. Os experimentos de imunohistoquímica confirmaram a especificidade do clone FabC-4 à antígenos tumorais. Este trabalho demonstra resultados biotecnológicos significantes com bibliotecas Fab recombinantes específicas na busca de anticorpos contra câncer de mama, criando novas possibilidades nas áreas diagnósticas e terapêuticas