Transcriptoma da glândula de peçonha de Crotalus durissus collilineatus: análise do perfil de expressão gênica

Crotalus durissus rattlesnakes are responsible for the major cases of lethality involving snakebites in Brazil. Crotalus d. collilineatus subspecie is related to a great number of accidents in Southeast and Central west regions, but few studies on its venom composition have been carried out. As an attempt to describe the transcriptional profile of the C. d. colllineatus venom gland, we generated a cDNA library and sequences obtained of random selected clones could be identified by similarity searches on existing databases. A total of 489 out of 673 ESTs produced readable sequences comprising 201 singletons and 47 clusters of two or more ESTs. From 248 contiguous sequences, 150 (60.5%) produced significant hits to known sequences. The results showed a predominance of toxin-coding expressed sequence tags (ESTs) instead of transcripts coding for proteins involved in all cellular functions. The most frequent toxin for this library was crotoxin, comprising 88% of toxin-coding sequences. The crotoxin B, a basic phospholipase A2 (PLA2) subunit of crotoxin, was represented in more variable forms comparing to the nonenzymatic subunit (crotoxin A), and the most of sequences coding this molecule were identified as CB1 isoform from Crotalus durissus terrificus venom. 4% of toxin-related sequences in this study were identified as Growth Factors, comprising five sequences for vascular endothelial growth factor (VEGF) and one for nerve growth factor (NGF) that showed 100% of identity with C. d. terrificus NGF. We also identified two clusters for metalloprotease from PII class comprising 3% of toxins, and two for serine proteases, including gyroxin (2.5%). The remaining 2.5% of toxin-coding ESTs represent singletons identified as homologue sequences to cardiotoxin, convulxin, angiotensin converting enzyme inhibitor and C-type natriuretic peptide, Ohanin, crotamin and PLA2 inhibitor. These results allowed the identifications of the most common classes of snake venom toxins, however some of them were unknown for C. durissus collilinatus subspecie, and even for Crotalus durissus specie, such as cardiotoxins and VEGF.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoMestre em Genética e BioquímicaAs serpentes da espécie Crotalus durissus são responsáveis pela maioria dos óbitos envolvendo acidentes ofídicos no Brasil. A subspécie Crotalus durissus collilineatus está relacionada a um grande número de acidentes nas regiões Sudeste e Centro-Oeste, porém poucos estudos sobre a composição desta peçonha têm sido realizados. Com o objetivo de determinar o perfil transcricional da glândula de peçonha de C. d. collilineatus, foi gerada uma biblioteca parcial de cDNA, e as seqüências obtidas de clones selecionados ao acaso foram identificadas por pesquisas de similaridade contra bancos de dados existentes. Um total de 673 clones foi seqüenciado resultando em 489 seqüências de qualidade, compreendendo 201 seqüências únicas e 47 redundantes. Das 248 seqüências consenso geradas, 150 (60,5%) apresentaram escores significativos de alinhamento com seqüências conhecidas. Os resultados demonstraram uma predominância de ESTs (expressed sequence tags) que codificam toxinas em relação às seqüências correspondentes à proteínas relacionadas a todas as funções celulares. A toxina mais freqüente nesta biblioteca consiste na crotoxina, que compreende 88% das seqüências relacionadas com toxinas. A crotoxina B, uma fosfolipase A2 (PLA2) básica da crotoxina, apresentou maior variabilidade quando comparada com a subunidade não enzimática (crotoxina A) desta enzima, sendo que a maioria das seqüências que codifica esta molécula apresentou homologia em relação à isoforma CB1 de Crotalus durissus terrificus. 4% das seqüências identificadas como toxinas neste estudo representam fatores de crescimento, correspondendo a cinco seqüências de fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e uma de fator de crescimento neural (NGF), que apresentou 100% de homologia com NGF de C. d. terrificus. Nós também identificamos dois clusters para metalloprotease da classe PII, compreendendo 3% do total de toxinas e dois clusters para serinoproteases (2,5% das toxinas). Os outros 2,5% da biblioteca consistem em singletons codificando seqüências homologas a carditoxina, convulxina, inibidor de enzima conversora de angiotensina e peptídeo natriurético tipo-C, Ohanina, crotamina e inibidor de PLA2. Estes resultados permitiram a identificação da maioria das classes de toxinas comumente encontradas em peçonhas de serpentes, entretanto, algumas destas eram até então desconhecidas para a peçonha de C. d. collilineatus e até mesmo para a espécie Crotalus durissus, como, por exemplo, a cardiotoxina e VEGF