Caracterización de la glucosidasa Lp_3220 de Lactobacillus plantarum

Grado en Biología. Trabajo Fin de Grado realizado en el Instituto de Ciencia y Tecnología de los Alimentos y Nutrición (ICTAN-CSIC).[ES]: En este trabajo se ha llevado a cabo el estudio de una α-glucosidasa. Estas enzimas son interesantes para la industria alimentaria por su capacidad de fermentar hidratos de carbono. Mediante un análisis bioinformático del genoma de Lactobacillus plantarum WCFS1 se identificó el gen lp_3220 codificante de la proteína Lp_3220 anotada como una α-glucosidasa. Para confirmar si esta anotación es correcta se procedió a la producción heteróloga en Escherichia coli, purificación y caracterización bioquímica de la proteína Lp_3220. El gen se clonó mediante un método de clonación independiente de ligación (LIC) en un vector de expresión que añade una etiqueta de polihistidinas para la posterior purificación de la proteína mediante cromatografía de afinidad a metales inmovilizados (IMAC). Se obtuvo una proteína de 63.9 kDa con actividad frente a 4-nitrofenil-α-D-glucopiranósido. La proteína Lp_3220 mostró un pH óptimo de 5 y una temperatura óptima de 37oC. Mostró estabilidad térmica en incubaciones de hasta las 24 h entre 22 y 37oC. En cuanto a la presencia de aditivos, se vio fuertemente inhibida por SDS y Hg2+.[EN]: This work has performed a study about an α-glucosidase. Because of its ability to ferment carbohydrates these enzymes are interesting for food industry. By a bioinformatic analysis of Lactobacillus plantarum WCFS1 genome the lp_3220 gene has been identified which codes for Lp_3220 protein named as an α-glucosidase. In order to confirm that the annotation is correct, we proceeded with Lp_3220 heterologous production in Escherichia coli, purification and biochemical characterization. The gene was cloned into an expression vector by using a ligation- independent cloning (LIC) method which adds a polyhistidine tag for the following protein purification by using immobilized metal affinity chromatography (IMAC). A 63.9 kDa protein was obtained, showing activity on α-D- glucopyranoside. Lp_3220 protein showed an optimal pH of 5 and an optimal temperature of 37oC. Also it showed thermal stability even after 24 h between 22 and 37oC. The effect of additives, it was strongly inhibited by SDS and Hg2+.Peer Reviewe