Associação dos polimorfismos da região promotora e 3' não traduzida do gene HLA-G com doenças autoimunes e inflamatória crônica

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2018.Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) e Artrite Reumatoide (AR) são doenças reumáticas inflamatórias crônicas de origem autoimune. Psoríase (PSO) é uma doença de pele comum, também inflamatória crônica, porém de origem desconhecida. As três doenças são multifatoriais e relacionadas ao sistema imunológico, às interações com o meio ambiente e à suscetibilidade genética. As moléculas de HLA-G são de grande importância na indução da tolerância imunológica e o estudo do gene HLA-G em doenças inflamatórias e reumatológicas é importante. O gene HLA-G possui sítios de variação (SNVs) em suas regiões regulatórias 5´URR e 3´UTR, que influenciam na expressão proteica. O presente estudo teve como principal objetivo estudar os SNVs da 5´URR em pacientes com LES, AR e PSO e indivíduos sem o histórico das doenças (466 indivíduos no total) e nove SNVs da 3´UTR em pacientes com LES e indivíduos controle (236 indivíduos no total) do Estado de Santa Catarina, visando compreender o papel desse gene no desenvolvimento das doenças e suas manifestações clínicas. Após sequenciamento das amostras e análises das sequências, foram realizadas análises de associação considerando cada locus em estudo caso-controle e caso-caso. No estudo da 3´UTR, os SNVs +3010CG, +3027AC, +3035CT, +3142CG e +3196CG foram associados ao risco de desenvolvimento de LES. As manifestações clínicas de LES também foram associadas aos SNVs da 3´UTR. A análise dos haplótipos, associou a UTR1 e as combinações UTR1+UTR1 e UTR1+UTR7 à proteção para o desenvolvimento de LES. Para a 5´URR, 17 SNVs foram associados ao risco de desenvolvimento de pelo menos uma das doenças, à LES (-725C>G>T, -483G>A, -297G>A e -284G>A), à AR (-762C>T, -725C>G>T, -540InsG a -533DelA, -509C>G, -486C>A, -483G>A e -297G>A) e à PSO (-762C>T, -725C>G>T, -716G>T, -689G>A, -646A>G, -633A>G, -509C>G, -483G>A, -443G-A, -540InsG a -533DelA, -400G>A, -391G>A, -369A>C, -355G>A e -297G>A). As manifestações clínicas das três doenças também foram associadas aos SNVs da 5´URR. Ainda, o haplótipo 5 da 5´URR foi associado ao risco de desenvolvimento de LES e AR. Concluímos que os SNVs das regiões 5´UR e 3´UT do HLA-G são associados à LES, AR e PSO bem como aos dados clínicos analisados neste trabalho. Assim, SNVs nestas regiões devem estar relacionadas com os níveis de expressão da molécula e consequentemente, com a imunorregulação, local ou sistêmica.Abstract : Systemic Lupus Erythematosus (SLE) and Rheumatoid Arthritis (RA) are chronic inflammatory rheumatic diseases of autoimmune origin. Psoriasis (PSO) is a common skin disease, also chronic inflammatory, but of unknown origin. The three diseases are multifactorial, related to the immune system, to environmental interactions and genetic susceptibility. HLA-G molecules were described as of great importance in the induction of immune tolerance and the study of HLA-G gene in inflammatory diseases and processes have become a challenge for researchers. The gene HLA-G has single nucleotide variations (SNV) in regulatory regions 5´URR and 3´UTR, described as having influence on protein expression. The present study had as main objective to study the SNV of 5´URR in SLE, AR and PSO patients and individuals without history of diseases (466 individuals in total) and nine 3´UTR SNV in SLE patients and control subjects (236 individuals in total) in the State of Santa Catarina, aiming to understand the role of this gene in the development of diseases and their clinical manifestations. After sequencing samples and analyzing the sequences, association analysis was carried out considering each locus in case-control and case-case study. The study of 3´UTR, the SNV +3010CG, +3027AC, +3035CT, +3142CG and +3196CG has been associated with the risk of development of LES. The clinical manifestations of LES were also associated to the 3´UTR SNV. The analysis of haplotypes associated UTR1 and the combinations UTR1 and UTR1 + UTR1 + UTR7 to protection against development of LES. For the 5´URR, 17 SNV were associated with risk of development for any disease; SLE (-725C>G>T, -483G>A, -297G>A and -284G>A), RA (-762C>T, -725C>G>T, -540InsG a -533DelA, -509C>G, -486C>A, -483G>A and -297G>A) and the PSO (-762C>T, -725C>G>T, -716G>T, -689G>A, -646A>G, -633A>G, -509C>G, -483G>A, -443G-A, -540InsG a -533DelA, -400G>A, -391G>A, -369A>C, -355G>A and -297G>A). The clinical manifestations of LES, RA and PSO were also associated to the 5´URR SNV. Still, the 5-haplotype of 5´URR was associated with the risk of development of LES and AR. We conclude that the SNV of the 5'UR and 3'UT regions of HLA-G are associated to SLE, RA and PSO as well as to the clinical data analyzed in this study. Thus, SNVs in these regions must be related to the expression levels of the molecule and consequently, to local or systemic immunoregulation