Terapia génica ex vivo para hemofilia B mediante vectores no virales y células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo humano

Introducción. El tratamiento actual de la hemofilia tan solo es paliativo y no curativo, con un elevado porcentaje de pacientes que desarrollan anticuerpos, que hacen del todo ineficaz el tratamiento. La terapia génica no viral asociada a células madre podría ser representar una alternativa curativa de la enfermedad. Objetivos. Establecer un protocolo de terapia génica ex vivo no viral para hemofilia B utilizando células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo (ASCs). Métodos. Las ASCs se aislaron a partir de lipoaspirados humanos. Se evaluaron varios sistemas de transfección: liposomas de DOTAP, polímeros de PEI, PAMAM y EPA, ICAFectin™441, nanopartículas magnéticas (MATra-A) y nucleofección. Las ASCs se transfectaron eficazmente mediante nucleofección con un plásmido con el gen de la EGFP y el gen del factor IX humano (FIX). Se analizó la expresión de FIX y su secreción in vitro. En los estudios in vivo en ratones inmunodeficientes, se indujo un daño hepático agudo antes de la administración intravenosa de las ASCs transfectadas, para asegurar el anidamiento celular. Resultados. Se obtuvieron poblaciones homogéneas de ASCs. La nucleofección representó el método de transfección no viral más eficaz y reproducible. El FIX se expresó en las ASCs y fue secretado al medio de cultivo. In vivo, se demostró el daño hepático y el anidamiento de las células EGFP-FIX positivas en pulmón, hígado, bazo y riñón, y se observó expresión de la proteína del FIX humano en plasma durante los 5 días estudiados. Conclusiones. Se ha optimizado un método reproducible de obtención de ASCs humanas a partir de lipoaspirados. Las ASCs se han logrado transfectar mediante nucleofección, obteniendo expresión y secreción de factor IX humano tanto en los medios de cultivo celular, como en el plasma de los ratones tratados con las células transfectadas