Estudios sobre la transcripción en cromosomas politénicos de Chironomus

Los resultados que han dado lugar a esta Tesis pueden agruparse en dos grandes apartados: uno de carácter metodológico, consistente en la puesta a punto de las técnicas bioquímicas aptas para el análisis de la actividad de transcripción en glándulas salivales de Chironomus; otro de carácter temático, donde se estudia la respuesta de la actividad de transcripción a la inhibición de síntesis de proteínas. 1. En primer lugar se han caracterizado las condiciones de marcado radiactivo del RNA, especialmente bajo incubación in vitro de las glándulas aisladas, así como las condiciones de extracción enzimática y posterior purificación del extracto que proporcionan una solución de elevada pureza en ácidos nucleicos. Se ha elaborado también un método de análisis electroforético del RNA glandular, mediante geles de azarosa en columna, caracterizándose de este modo los perfiles de RNA recién sintetizado y estable en Chironomus pallidivittatus y Chironomus thummi. De especia interés, por su total novedad en este sistema biológico, ha sido la puesta a punto de un método que nos permite estimar la tasa de captación (uptake) de uridina-H³, medida como radioactividad ácido-soluble, en glándulas salivales. Su uso nos ha permitido:- Observar que la tasa de captación de uridina es diferencialmente modificada por aplicación in vitro de diversos inhibidores. Comprobar que la discrepancia observada entre el tamaño e intensidad de marcado autorradiográfico en algún puff particular, como consecuencia de un choque térmico, es explicable por los cambios inducidos en la tasa de captación de uridina por efecto del tratamiento.Estas observaciones nos han llevado, para una estimación relativa de la actividad de transcripción, a la necesidad de elaborar factores de corrección que eliminen el influjo de posibles cambios en la tasa de captación del nucleósido precursor. Su aplicación puede modificar cuantitativa, o incluso cualitativamente, las conclusiones inicialmente alcanzadas de la sola consideración de la radiactividad incorporada en RNA.2. En el aspecto temático se ha observado que la aplicación de cicloheximida o anisomicina, a dosis fuertemente inhibitorias de la síntesis de proteínas, inducen un incremento de la radioactividad incorporada en RNA. Dicho incremento no es expicable ni por una modificación en la estabilidad del RNA recién sintetizado ni, al menos totalmente, por el aumento producido en la tasa de captación de uridina-H³. Ello parece indicar que en tales condiciones se induce una activación de la síntesis del RNA. La medida de la actividad RNA polimerasa en células fijadas ha confirmado, de un modo directo, la existencia de dicho aumento de la actividad de transcripción, y que éste es debido, al menos en parte, a una mayor actividad de "iniciación". Por último, el análisis electroforético ha demostrado que la respuesta a la inhibición de la síntesis de proteínas es diferente para las distintas especies de RNA recién sintetizado: Se produce un incremento máximo para el RNA de pequeño tamaño (4-5S). En menor medida, dicho incremento afecta también al hnRNA de grande y mediano peso molecular. La respuesta del RNA de origen nucleolar (pre-rRNA) es distinta según los inhibidores sean aplicados in vitro (produciéndose activación) o in vivo (produciéndose entonces una inhibición selectiva de esta especie de RNA). Estos datos, y otras evidencias morfológicas aducidas, sugieren la existencia de distintos mecanismo de regulación de la transcripción en células politenizadas, con alta especificidad local de acción. Estos mecanismos son discutidos a la luz del fenómeno de "control estricto", y su observación en organismos eucarióticos