RESISTENZA AI TRIAZOLI IN ISOLATI CLINICI DI ASPERGILLUS FUMIGATUS IN LOMBARDIA

Aspergillus fumigatus \ue8 in genere sensibile agli antifungini, tuttavia negli ultimi anni con sempre maggiore frequenza viene segnalata resistenza agli azoli, sia intrinseca che acquisita a seguito di trattamento cronico. La resistenza \ue8 per lo pi\uf9 associata ad alterazione in cyp51A, gene che codifica l\u2019enzima target degli azoli, e i codoni 54, 98 e 220 sono quelli pi\uf9 frequentemente coinvolti nella mutazione. In Olanda e in altri Paesi europei l\u2019emergenza di multiresistenza ai triazoli in ceppi clinici \ue8 stata associata alla comparsa del meccanismo di resistenza TR/L98H. Obiettivo del presente lavoro \ue8 stato quello di ricercare il meccanismo di resistenza TR/L98H in ceppi clinici di A. fumigatus resistenti agli azoli, isolati in Lombardia. I saggi di sensibilit\ue0 in vitro a itraconazolo, voriconazolo e posaconazolo sono stati effettuati secondo due metodiche, microdiluizione in brodo (EUCAST) ed E-test. Per la ricerca del meccanismo di resistenza TR/L98H \ue8 stata effettuata amplificazione mediante PCR e sequenziamento di una parte della regione codificante e del promotore del gene cyp51A. Le sequenze ottenute sono state analizzate per individuare la mutazione puntiforme T364A alla base della sostituzione aminoacidica L98H e il tandem di 34 paia di basi ripetute nel promotore (tandem repeat, TR). Dei sei ceppi resistenti a itraconazolo (MIC >32mg/L) studiati, 3 sono risultati resistenti anche a posaconazolo (MIC >0.25mg/L) e due con una ridotta sensibilit\ue0 a voriconazolo (MIC 652mg/L). Il meccanismo di resistenza TR/L98H \ue8 stato riscontrato in 5 dei 6 ceppi resistenti. In un ceppo resistente a itraconazolo e posaconazolo non \ue8 stata rilevata la sostituzione L98H, ma la sostituzione di una guanina con una adenina in posizione 161 all\u2019interno del gene cyp51A. (mutazione puntiforme G161A) I sei ceppi erano stati isolati dalle secrezioni respiratorie di sei differenti pazienti: tre bambini affetti da fibrosi cistica, di cui due in trattamento da oltre un anno con voriconazolo o itraconazolo, un paziente con broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO) in trattamento cronico con voriconazolo e due soggetti non sottoposti a terapia antifungina. La mutazione puntiforme G161A era presente nel ceppo isolato dal paziente con BPCO. Dai risultati di questo studio emerge che anche in Italia sono presenti ceppi clinici di A. fumigatus resistenti ai triazoli e che, nella maggior parte dei casi, il fenotipo e il meccanismo di resistenza sono identici