Effetti della stimolazione con onde d’urto defocalizzate su colture di cellule endoteliali microvascolari umane (hmec – 1)

Le onde d\u2019urto defocalizzate (uSW) sono in grado di stimolare la rigenerazione cutanea ed il trofismo tissutale, principalmente attivando i processi di neoangiogenesi, i cui dettagli, pero\u2019, risultano ancora in parte sconosciuti. Scopo dello studio qui proposto \ue8 stato quello di valutare, in vitro, su colture di cellule endoteliali microvascolari di derivazione umana (HMEC-1), gli effetti, a breve termine, derivanti dalla stimolazione con onde d\u2019urto defocalizzate. MATERIALI E METODI Colture di cellule endoteliali microvascolari di derivazione umana HMEC - 1 sono state sottoposte a diversi regimi di stimolazione con uSW, mediante utilizzo di litotritore a sorgente elettroidraulica (Dermagold, MTS) (EFD 0.01 mJ/mmq; EFD 0.02 mJ/mmq; EFD 0.10 mJ/mmq, rispettivamente a 200 ed 800 colpi totali per ciascun livello di energia). HMEC \u2013 1 \ue8 la prima linea immortalizzata di cellule endoteliali microvascolari di derivazione umana, in grado di mantenere in coltura le caratteristiche morfologiche, fenotipiche e funzionali delle cellule originarie normali. La vitalit\ue0 cellulare post \u2013 trattamento \ue8 stata verificata mediante esame spettrofotometrico (XTT \u2013 assay) a 24 h.; per valutare inoltre il potenziale effetto angiogenetico, le cellule sono state poste in coltura su substrato Matrigel, e le strutture simil - microvascolari formatesi sono state poi quantificate, contando le connessioni capillari mediante osservazione al microscopio invertito. Quando infatti le cellule HMEC \u2013 1 vengono poste in coltura su tale tipo di terreno (secondo un modello descritto in letteratura), possono formare una rete tridimensionale di strutture simil tubulari (o simil \u2013 capillari), comparabili alla cascata finale del processo angiogenetico in vivo. E\u2019 stata anche valutata l\u2019espressione genica a breve termine (3 h. dopo stimolazione uSW), mediante tecnica microarray . I dati sono stati elaborati statisticamente mediante test di Dunnet. RISULTATI I risultati pi\uf9 rilevanti sono stati ottenuti per stimolazione con le basse energie e pi\uf9 basso numero di colpi. I risultati dell\u2019analisi spettrofotometrica a 24 h. hanno rilevato un aumento di attivit\ue0 metabolica nelle colture di cellule trattate vs. i controlli (rapporto di Densit\ue0 Ottica 1.8). Relativamente ai tests di angiogenesi (a 24h), si \ue8 rilevata la formazione di strutture simil \u2013 capillari in quantit\ue0 maggiore nelle colture sottoposte ad uSW, rispetto ai controlli (31.40 \ub1 2.064 vs 17.00 \ub1 3.286; p