Efecto combinado antitumoral con WT1-siRNA y curcumina sobre la proliferación de células de melanoma murino B16F10 in vitro.

El gen del tumor de Wilm´s (WT1), es un factor de transcripción involucrado en la modulación de genes en procesos de proliferación, crecimiento y apoptosis en muchas células transformadas donde se encuentra sobre expresado, además de ser indispensable para la supervivencia celular. WT1 es importante como marcador para el diagnóstico de melanoma. En este trabajo investigamos si el silenciamiento de WT1 en la línea celular de melanoma murino B16F10 con un RNA de interferencia (siRNA) en combinación de curcumina (Curcuma longa) tiene un efecto potencializador antitumoral. Las células B16F10 fueron tratadas con el plásmido que contiene el iRNA, curcumina y la combinación de ambos, obteniendo una concentración citotóxica media (CC50) por medio de la técnica de [3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5- diphenyl tetrazolium bromide] MTT a las 24 horas de 0.5 µg para el WT1-iRNA y de 7.5 µM para la curcumina. Además, se evaluó el efecto citotóxico dependiente de dosis a las 48 y 72 horas. Se observó que la administración combinada de WT1-iRNA y curcumina tienen un efecto sinérgico en inhibir la proliferación celular en más de un 85%. Comprobado el silenciamiento de WT1 por western blot, en las células tratadas se observó apoptosis temprana con la técnica de Anexina V/ Yoduro de propidio, así como la formación de cuerpos apoptóticos y fragmentación del DNA; de igual forma, la nula capacidad de proliferación con el ensayo clonogénico. Estos resultados indican la inducción de apoptosis con el silenciamiento de la proteína de WT1 con iRNA y curcumina solos o combinados. Sugerimos que la estrategia de combinación de estos compuestos tiene potencial en la utilización alternativa a la quimioterapia para el tratamiento de melanoma de una forma no agresiva y con resultados prometedores