Transformation du champignon ectomycorhizien Hebeloma cylindosporum par Agrobacterium tumefaciens

Bien qu'Agrobacterium tumefaciens ne soit pas pathogène des champignons, il peut transférer l'ADNT de son plasmide Ti à des cellules fongiques qui l'intègrent dans leur ADN génomique. Cette propriété est à l'origine du récent développement d'une méthode de transformation des espèces fongiques qui présente plusieurs avantages par rapport aux méthodes traditionnelles utilisant des plasmides circulaires ou linéaires. D'une part, elle ne nécessite pas la préparation de protoplastes et d'autre part le mode d'intégration de l'ADN-T dans l'ADN génomique permet de caractériser facilement les séquences génomiques flanquantes. Peu de Basidiomycètes ont pour l'instant été transformés en utilisant cette bactérie. Nous décrivons ici une méthode de transformation génétique d'Hebeloma cylindrosporum, Basidiomycète ectomycorhizien, par A. tumefaciens. Une analyse par PCR et Southern blot a montré que tous les transformants obtenus (treize pour l'instant) ne possèdent qu'une seule copie de l'ADN-T intégrée. Une analyse par TAIL PCR nous a permis d'identifier les sites d'intégration de ces insertions. Cette méthode est actuellement utilisée au laboratoire pour obtenir des mutants non mycorhiziens d'H. cylindrosporum. Les résultats présentés ici montrent que l'identification des gènes inactivés est plus facile que dans le cas de la mutagenèse par insertion de plasmide. (Texte intégral