Identification d'un cluster de gènes potentiellement impliqués dans le pouvoir pathogène d'Alternaria brassicae, l'agent du black spot des crucifères

Alternaria brassicae est l'un des agents causals du black spot, une maladie transmise par les semences et responsables d'importants dégâts sur les cultures de crucifères. Ce champignon produit in vitro et in planta un cyclodepsipeptide nommé destruxine B qui pourrait correspondre à une toxine hôtespécifique. Nos études portant sur l'analyse des facteurs lies au pouvoir pathogène chez les Alternaria pathogènes des crucifères, le clonage de gènes potentiellement impliqués dans la synthèse de cette toxine a été entrepris. La stratégie utilisée a consisté à rechercher des portions de gènes codant des enzymes de type cyclic-peptide synthase (CPS). Dans un premier temps, un fragment d'ADN correspondant à l'un des modules d'activation d'une telle enzyme a été isolé par PCR à l'aide d'amorces dégénérées puis par PCR-walking. La portion d'ADN ainsi obtenue a ensuite été utilisée comme sonde pour cribler une banque cosmidique du génome d'A. brassicae. L'insert d'environ 35 Kb de l'un des clones positifs est actuellement en cours de séquençage. Les premiers résultats collectés montrent que la CPS identifiée est constituée d'au moins 6000 acides amines qui représentent 4 modules d'activation. A environ 15 Kb de ce gène, une séquence représentant une ORF d'environ 1500 acides aminés est également présente. Cette ORF correspond à un ABC transporteur. Ces éléments suggèrent que le gène CPS identifié est lié a la production d'un peptide cyclique (destruxine B ?) qui serait secrété par le champignon via ce transporteur membranaire. Pour tester cette hypothèse la transformation d'A. brassicae et la production sous forme recombinante des différents modules fonctionnels de la CPS sont envisagées. (Texte intégral