Papel de la activación plaquetaria y leucocitaria en la patogenia de la trombosis en la trombocitemia esencial

[spa] El curso clínico de la trombocitemia esencial (TE) se caracteriza por un elevado riesgo de aparición de complicaciones trombóticas, las cuales constituyen la principal causa de muerte en estos pacientes. Si bien la causa fundamental de la trombosis en esta enfermedad parece ser el aumento del número de plaquetas y sus alteraciones bioquímicas y funcionales, no existe una correlación clara entre estos factores y el desarrollo de trombosis. El objetivo de la presente tesis fue conocer el papel de la activación plaquetaria y leucocitaria en la trombosis de los pacientes con TE. Para ello, se determinó mediante citofluorometría el estado de activación plaquetaria y leucocitaria en 53 pacientes con TE (26 con historia de trombosis previa) y en otros tantos sujetos sanos de igual edad y sexo. Las determinaciones incluyeron la expresión de P-selectina en plaquetas (en condiciones basales y después del estímulo con ADP, trombina, ácido araquidónico [AA] o colágeno), los complejos plaqueta-neutrófilo y plaqueta-monocito, el CD11b en neutrófilos y monocitos y la expresión de factor tisular en los monocitos (FTm). Además, se investigaron el porcentaje de plaquetas reticuladas (PR), la resistencia adquirida a la proteína C activada (RAPCA), la expresión plaquetaria de factor tisular (FT) y las concentraciones plasmáticas de FT, factores de la coagulación, P-selectina soluble (sP-selectina), CD40 ligando soluble (sCD40L), antígeno del factor de von Willebrand (VWF:Ag), trombomodulina soluble (sTM), dímero D y fragmento 1+2 de la protrombina. Estos parámetros se correlacionaron también la presencia de la mutación V617F de JAK2 o su carga mutacional.En comparación con los controles, los pacientes con TE tenían una mayor expresión de P-selectina basal e inducida por trombina o AA, así como unos valores significativamente más elevados de complejos plaqueta-neutrófilo y plaqueta-monocito, expresión de CD11b en neutrófilos y expresión basal de FTm. La P-selectina basal e inducida por AA, el CD11b monocitario, la expresión de FTm inducida por lipopolisacárido, el porcentaje de PR, RAPCA y las concentraciones plasmáticas del factor V, factor VIII, VWF:Ag, sP-selectina y sCD40L se hallaron significativamente más elevadas en pacientes con historia de trombosis que en aquellos sin trombosis. En el estudio multivariado, el porcentaje de PR, la concentración de factor V y la presencia de RAPCA se asociaron independientemente con un aumento del riesgo de trombosis. Los pacientes con la mutación V617F de JAK2 tuvieron unos valores más elevados de P-selectina basal e inducida por AA que los pacientes sin esta condición. Finalmente, se objetivó un efecto dosis del porcentaje mutacional (>/- 12%), asociándose éste a una mayor concentración de FT, sP-selectina, sCD40L, FVW:Ag y menor de proteína S (PS).Estos resultados sugieren que la activación plaquetaria y monocitaria, así como la renovación plaquetaria, factor V y RAPCA pueden desempeñar un papel importante en la patogenia de la trombosis de los pacientes con TE, así como la posibilidad de la detección de pacientes con un mayor riesgo trombótico. La asociación entre la carga alélica de V617F con la disminución de PS o incremento de FT y de los marcadores solubles de activación plaquetaria y endotelial sugiere que dicha mutación podría promover un estado pretrombótico en la TE. EXTRACTO. Si bien la causa fundamental de la trombosis en la trombocitemia esencial (TE) parece ser el aumento del número de plaquetas y sus alteraciones bioquímicas y funcionales, no existe una correlación clara entre estos factores y el desarrollo de trombosis. Los resultados de la presente tesis doctoral sugieren que la activación plaquetaria y monocitaria, así como la renovación plaquetaria, factor V y la resistencia adquirida a la proteína C activada pueden desempeñar un papel importante en la patogenia de la trombosis de los pacientes con TE, así como la posibilidad de la detección de pacientes con un mayor riesgo trombótico. La asociación entre la carga alélica de V617F con la disminución de proteína S libre o incremento de factor tisular y de los marcadores solubles de activación plaquetaria y endotelial sugiere que dicha mutación podría promover un estado pretrombótico en la TE. PALABRAS CLAVE. Trombocitemia esencial, trombosis, activación plaquetaria, activación leucocitaria, coagulación, mutación V617F de JAK2.[eng] "ROLE OF THE PLATELET AND LEUKOCYTE ACTIVATION IN THE PATHOGENESIS OF THE THROMBOSIS IN ESSENTIAL THROMBOCYTHEMIA", by EDUARDO ARELLANO RODRIGOTEXT:The mechanisms accounting for the increased risk of thrombosis in patients with essential thrombocythemia (ET) are not well known. The aim of the present thesis was to ascertain the role of platelet and leukocyte activation in the thrombosis of ET and its relationship with the JAK2 mutation.In 53 ET patients (26 with a history of thrombosis), platelet P-selectin (measured both at baseline and after stimulation with ADP, thrombin, arachidonic acid (AA), and collagen) and leukocyte CD11b expression, reticulated platelets (RP) percentage, platelet and monocyte tissue factor (mTF) expression, acquired activated protein C resistance (aAPCR), and plasma levels of tissue factor (TF), coagulation factors, soluble P-selectin (sP-selectin), soluble CD40 ligand (sCD40L), von Willebrand factor antigen (VWF:Ag), thrombomodulin, D-dimer and prothrombin fragment 1+2 were compared with those in matched healthy individuals and correlated with thrombosis occurrence and JAK2 mutational load. As compared with controls, ET patients had significantly higher values of baseline P-selectin and thrombin- and AA-induced platelet P-selectin expression, as well as higher platelet-neutrophil and platelet-monocyte complexes, neutrophil CD11b expression and baseline mTF expression. ET patients with thrombosis had significantly higher values for platelet P-selectin, monocyte CD11b, lipopolysaccharide-induced mTF expression and RP percentage, aAPCR, and levels of factors V and VIII, VWF:Ag, sP-selectin and sCD40L than patients without thrombosis and controls. At multivariate study, RP percentage, factor V levels, and aAPCR were independently associated with an increased risk of thrombosis. Patients with the JAK2 mutation showed higher baseline and AA-induced platelet P-selectin expression than those with wild-type allele. A mutant allele dosage effect ( 12 %) was observed for sP-selectin, sCD40L, TF, VWF:Ag and free protein S (PS) levels. These results support a role for platelet and monocyte activation, platelet turnover, factor V, and aAPCR in the thrombosis of ET, as well as their potential to identify patients at greater risk of thrombosis. The association between JAK2 V617F allele burden and either decreased free PS or increased TF and markers of platelet and endothelial activation could suggest that this mutation would promote an enhanced prethrombotic state in ET. EXTRACT. The mechanisms accounting for the increased risk of thrombosis in patients with essential thrombocythemia (ET) are not well known. The aim of the present thesis was to ascertain the role of platelet and leukocyte activation in the thrombosis of ET and its relationship with the JAK2 mutation. The results of the present thesis support a role for platelet and monocyte activation, platelet turnover, factor V, and aAPCR in the thrombosis of ET, as well as their potential to identify patients at greater risk of thrombosis. The association between JAK2 V617F allele burden and either decreased free PS or increased TF and markers of platelet and endothelial activation could suggest that this mutation would promote an enhanced prethrombotic state in ET. KEY WORDS. Essential thrombocythemia, thrombosis, platelet activation, leukocyte activation, coagulation, JAK2 V617F mutation