Estudo da conjugação de lipossomas de longo tempo de circulação com ácido fólico para direcionamento para os recetores de folato

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2016Nas últimas décadas, o direcionamento ativo de fármacos para o seu local de ação tem sido um dos principais temas de investigação na área de oncologia. Uma das estratégias mais utilizadas para atingir este objetivo é o encapsular de moléculas de fármaco em lipossomas dirigidos especificamente a recetores ou antigénios presentes em células tumorais. Desta forma é possível aumentar o índice terapêutico destes medicamentos, resultando numa maior eficiência e especificidade e assim obtendo menos efeitos secundários. No presente estudo, uma formulação de lipossomas de longo tempo de circulação utilizando um método único de ligação covalente entre o ácido fólico e os lipossomas peguilados pré-formados foi otimizada. A presença de polietilenoglicol, para além de permitir um tempo de circulação mais longo, em conjunto com o pequeno tamanho de partícula, aumenta a acumulação dos lipossomas nos tecidos tumorais. Por outro lado, o ácido fólico é um ligando para os recetores de folato, que se encontram sobre-expressos em certos tipos de células tumorais tais como no cancro dos ovários, testículos e cérebro, permitindo o direcionamento ativo pretendido. Este estudo consiste na otimização do processo de lavagem da formulação lipossomal direcionada com ácido fólico covalentemente ligado ao grupo maleimida em DSPE-PEG2000-maleimida, previamente desenvolvida na disciplina de Projeto III e no estudo da associação desta formulação a células que sobre-expressam os recetores de folato. Com esta otimização conseguiu-se um aumento da eficiência de ligação do ácido fólico aos lipossomas. A microscopia de fluorescência foi utilizada para estudar, qualitativamente, a associação in vitro dos lipossomas, marcados com uma sonda fluorescente (PE rodamina B), com e sem ácido fólico, em células confluentes B16F10 e HeLa. Os resultados mostraram uma associação aumentada dos lipossomas direcionados com ácido fólico, quando comparados com os lipossomas não ativamente direcionados.In recent decades, active drug targeting has been one of the biggest research subjects in oncology. One of the strategies used to achieve this goal is to encapsulate drug molecules in liposomes specifically targeted to receptors or antigens in tumor cells. In that way it is possible to increase these drugs therapeutics index, resulting in higher efficiency and specificity and managing to cause less side effects. In the present study, a formulation of long circulation liposomes using a unique method of covalent link between folic acid and preformed pegylated liposomes was optimized. The presence of PEG, besides allowing for longer circulation time, and in conjunction with the small particle size, intensifies liposomes accumulation in tumor tissues. Furthermore, folic acid is a ligand for folate receptors, which are overexpressed in certain types of cancers such as cancer of the ovaries, testes and brain, allowing for the intended active targeting. The study consists in the optimization of the liposome directed with folic acid covalently connected to the maleimide in DSPE PEG2000 maleimide washing process, that was previously developed in Projeto III and in the study of the association of this formulation in cells that overexpress folate receptors. With this optimization it was possible to increase the binding efficiency of folic acid to the liposomes. Fluorescent microscopy was used to qualitatively analyze the in vitro association of liposomes, labeled with PE-rhodamine B, with and without folic acid, by confluent B16F10 and HeLa cells. Results showed an enhanced uptake of folic acid-directed liposomes, when compared with non-folic acid-directed liposomes