Muuntohuumeiden lisääminen ja validointi GC-MS-menetelmään

Tämä opinnäytetyö tehtiin Terveyden ja hyvinvoinnin (THL) oikeustoksikologiayksikössä Tilkanmäen laboratoriossa. Laboratorio on erikoistunut biologisesta matriisista tehtäviin huumaus- ja lääkeainetestauksiin kromatografis-massaspektrometrisin menetelmin. Lisäksi laboratoriossa käytetään immunologisiin tekniikoihin perustuvia menetelmiä ja kaasukromatografista menetelmää alkoholitestauksessa. Se on FINAS:in akkreditoima testauslaboratorio T077 SFS-EN ISO/IEC 17025:2005 mukaisesti. Opinnäytetyön tavoitteena oli 14 muuntohuumeen lisääminen ja validointi ”Amfetamiinijohdannaisten seulonta ja pitoisuusmääritys verestä, seerumista ja virtsasta” GC-MS-menetelmään. Aineet ovat amfetamiinijohdannaisia ja täten sisältävät samankaltaisia rakenneosia kuin amfetamiini, joten niiden uskottiin soveltuvan hyvin menetelmään. Validoinnin tarve nousi esille, kun huomattiin, että viime vuosien aikana muuntohuumeiden käyttö on vähitellen lisääntynyt ja menetelmää piti analyyttien osalta laajentaa. Alussa testattiin aineiden sopivuus nykyiseen menetelmään käsittelemällä näytteet eri pitoisuuksilla menetelmäohjeen mukaisesti sekä verimatriisilla että ilman. Lisäksi tutkittiin aineiden erottuvuutta muista samankaltaisista aineista. Validointi suoritettiin viitenä päivänä niin, että joka päivä tutkittiin lineaarisuutta sekä tarkkuutta. Tämän lisäksi yksittäisinä päivinä tutkittiin stabiilisuutta, ylempää ja alempaa määritysrajaa sekä selektiivisyyttä. Menetelmässä näytteeseen (200 µl) lisätään 0,1 M HCl -liuosta, johon on liuotettu sisäinen standardi. Tämän jälkeen näyte puskuroidaan emäksiseksi ja uutetaan tolueenilla yksitellen vorteksoimalla, jotta uuttoliuoksen sisältämä HFBA-derivatisointiaine ehtii vaikuttaa. Työ ja validointi kokonaisuudessaan onnistui hyvin ja odotetusti. Tiedetään, että amfetamiinijohdannaiset ja synteettiset katinonit ovat haastavia tutkittavia herkkyytensä takia, varsinkin kun kyse on muuntohuumeista. 14:sta aineesta suurin osa saatiin validoitua kvantitatiiviselle tasolle. Neljä ainetta validoitiin kvalitatiiviselle tasolle ja HMMA:n validointi jouduttiin keskeyttämään, koska aine ei näkynyt spektreissä alle 250 ng/ml pitoisuuksilla. Aineiden haastavuuden takia voidaan kuitenkin todeta, että tavoitteisiin päästiin ja validointi onnistui.This study was made in The National Institute of Health and Welfare’s laboratory of Forensic Toxicology in Tilkanmäki. The laboratory is specialized in drug and narcotics analyzes from biological matrix by using chromatographic-mass spectrometric methods. In addition to this, the laboratory uses methods based on immunological techniques and gas chromatographic methods for alcohol testing. It is accredited by FINAS (Finnish Accreditation Service) according to SFS-EN ISO/IEC 17025:2005 standard. The aim of this study was to add and validate 14 design drugs to ”Amfetamiinijohdannaisten seulonta ja pitoisuusmääritys verestä, seerumista ja virtsasta” GC-MS-method. Substances are amphetamine-type stimulants and so contain similar components as amphetamine, so they were believed to fit to the method. Need for validation came up when it was noted that during the last year’s use of design drugs has gradually increased and the method needed to be expanded on part of the analytes. At the beginning, the suitability of the substances for the current method was tested by processing samples with different concentrations according to the method guide with and without blood matrix. Additionally, the distinctness of the substances was tested from other similar type substances. Validation was performed within five days so that every day linearity was researched together with accuracy. In addition to this, on individual days stability, upper and lower limits of detection and quantitation and selectivity were researched. In the method 0.1 M HCl solution, which contained an internal standard, was added to the sample (200 µl). After this the sample was buffered to an alkaline solution and then extracted with toluene one by one using vortex at the same time so that the derivatizing reagent HFBA had time to react. The project and validation succeeded as expected and well as a whole. It is known, that amphetamine-type substances and synthetic cathinones are challenging to research because of their sensitivity, especially when it comes to design drugs. Most of the 14 substances could be validated to the quantitative level. Four substances were validated to the qualtitative level and the HMMA’s validation had to be excluded because the substance was not visible under 250 ng/ml concentration levels in the spectras. Due to the challenges of the substances, it can be said however, that the goals were achieved and the validation was a success