A transzglutamináz 2 gén transzkripciójának szabályozása egér timocitákban

A transzglutamináz 2 egy multifunkcionális fehérje, amely számos biológiai folyamatban vesz részt, így a fejlődő timociták apoptózis programjában is. Laboratóriumunkban korábban kimutatták, hogy az in vivo körülmények között elhaló timocitákban indukálódik a transzglutamináz 2 gén expressziója, viszont in vitro körülmények között nem. Ez a megfigyelés csak úgy magyarázható, hogy az elhaló timociták a szöveti környezetből kapnak olyan szignálokat, amelyek hatására indukálódik bennük a transzglutamináz 2 expresszió. Későbbi vizsgálatok kimutatták, hogy a timociták környezetében megtalálható, a már elhalt sejteket fagocitáló makrofágok által kibocsájtott retinoidok, adenozin és TGFβ vesz részt a Tgm2 indukciójában, ezért kísérleteink során e három szignál jelpályáját vizsgáltuk a Tgm2 kifejeződésének szabályozásában. Korábban publikusan elérhető DNázI-szek és ChIP-szek adatok alapján 5 lehetséges cisz-regulációs elemet találtunk a Tgm2 gén környezetében, amelyekről sikerült enhanszer RNS méréssel igazolni, hogy valóban szerepet játszanak az általunk alkalmazott szignálok hatására a gén szabályozásában. Ezek az enhanszerek a Tgm2 transzkripciós startpontjától +30 kb-ra, -7.9 kb-ra, -13 kb-ra, -20 kb-ra és -28 kb-ra helyezkednek el. Diplomamunkám során az általunk alkalmazott szignálokat közvetítő transzkripciós faktorok, valamint koaktivátorok feldúsulását vizsgáltuk kromatin immunprecipitáció technikával az előzőleg megállapított enhanszereken. A vizsgált transzkripciós faktorok az RXR, a CREB, a SMAD4, a koaktivátorok pedig a P300 és a CBP voltak. Kísérleteink során azt tapasztaltuk, hogy a 9-cisz retinsavra aktiválódó RXR és a mindhárom szignálra reagáló CREB kötődése mindegyik vizsgált enhanszeren megtörténik, míg a TGFβ-ra aktiválódó SMAD4 csak kettőhöz kötődik a vizsgált enhanszerek közül. Továbbá a szignálok kombinált alkalmazásával azt is sikerült kimutatnunk, hogy a retinoid- és TGFβ mediált útvonalak szinergizálnak a -7,9 kb, -13 kb és -20 kb enhanszer régiókon. Eredményeink további részletekkel gazdagítják az egér timocitákban apoptózis során indukálódó Tgm2 gén szabályozásáról meglévő ismereteinket.MSc/MAmolekuláris biológiamagyarBiokémia-genomikanappal