sep10/med31 mutáns allél vizsgálata Schizosaccharomyces pombe modellszervezetben

A gének által kódolt információk kifejeződését a génexpresszió teszi lehetővé. A génexpressziónak két részfolyamatát különböztetjük meg, a transzkripciót illetve a transzlációt. A transzkripció során az RNS-polimerázok segítségével RNS másolat képződik a DNS nukleotidsorrendjéről, míg a transzláció során az mRNS genetikai kódjának lefordításával polipeptid lánc keletkezik, azaz fehérje szintetizálódik. Fontos, hogy egy adott génről megfelelő mennyiségű géntermék szintetizálódjon térben és időben, ugyanis ha a normál mennyiséghez viszonyítva nagyobb, vagy kisebb mennyiség van jelen egy fehérjéből vagy enzimből, akkor az a sejtek rendellenes működéséhez, betegségek kialakulásához vezethet. A transzkripció precíz szabályozása felelős a sejt számára ideális fehérje vagy enzim mennyiség biztosításért. Ezen szabályozás egyik kiemelten fontos résztvevője a Mediátor komplex, amely kapcsolatban áll mind a specifikus transzkripciós regulátor fehérjékkel, mind az RNS polimeráz II enzimmel. A Mediátor egy fehérje komplex, amely több alegységből áll. Ezek az alegységek az úgynevezett mediátor, azaz a „med” gének termékei. Kiemelkedő szereppel rendelkeznek, hiszen e gének hibás működése további gének transzkripciójára hat és azok helytelen működését váltja ki, melyeknek aztán negatív hatásai lehetnek a különböző sejtfolyamatokat illetően. A Mediátor alegységeinek génjei megtalálhatóak szinte minden eukarióta fajban, funkciójuk hasonló, továbbá evolúciósan is konzervatívnak bizonyultak, így megismerésük fontossága alapkutatási szempontokon túl is kiemelendő. Munkám során a Mediátor komplex egyik alegységét, a Schizosaccharomyces pombe hasadóélesztő sep10/med31 nevű génjét vizsgáltam. Célunk a gén funkciójának részletesebb megismerése volt a Genetikai és Alkalmazott Mikrobiológiai Tanszék korábbi munkáival összhangban. Bioinformatikai vizsgálatokkal arra kívántunk fényt deríteni, hogy a vizsgált gén megtalálható-e magasabbrendű fajokban. Különböző fajok Med31 fehérjéit összehasonlítva arra kerestük a választ, hogy hol találhatóak konzerválódott aminósavak és konzervatívabb régió a génterméken belül. A feltételezett konzervatív régió DNS szekvenciájának ismeretével tervezett restrikciós vágóhelyet is tartalmazó primerekkel pedig, egy „csonkolt”, deléciós mutáns allélt kívántunk létrehozni, mely túltermelő vektorba klónozható. Az ellenőrzött nukleotidsorrendű plazmidkonstrukcióval a sep10/med31 deléciós mutáns Sch. pombe sejtjei aztán transzformálhatóak. Az elkészült és leellenőrzött transzformánsokat, ezután fenotípusos vizsgálatoknak kívántuk alávetni azért, hogy ellenőrizzük a „csonkolt” allél működését.BSc/BABiológiag