The in vitro and in vivo antifungal susceptibility testing of Candida parapsilosis sensu stricto, Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis isolates

A C. parapsilosis sensu lato fajt molekuláris biológiai módszerekkel a C. parapsilosis sensu stricto, a C. orthopsilosis és a C. metapsilosis fajokra különítették. Ez utóbbi két faj in vitro antifungális érzékenysége, az irodalmi adatok alapján eltér a C. parapsilosis sensu stricto fajétól, azonban terápiás ajánlások jelenleg csak a C. parapsilosis sensu stricto ellen ismertek. Munkánk során először elvégeztük az idő-ölés görbék felvételét az amphotericin B, a fluconazol, a voriconazol, a posaconazol, és az 5-fluorocytozin ellen. Az amphotericin B a csoport mindhárom tagja ellen 1-4 µg/mL koncentrációkon fungicid hatású volt. A fluconazol, a „psilosis” csoport minden tagjával szemben ≤8 µg/mL koncentráción, fungisztatikus hatású volt. A voriconazol, a posaconazol és az 5-fluorocytozin a vérben még elérhető koncentrációkon kitűnő fungisztatikus hatást mutattak a „psilosis” csoport mindhárom tagja ellen, bár több C. orthopsilosis izolátum csak 4-8×MIC voriconazol koncentrációkon volt gátolható. Az átmenetileg neutropéniássá tett egerek esetén, a „psilosis” csoport tagjai ellen a napi 1 mg/kg amphotericin B, a napi 10 mg/kg és 20 mg/kg fluconazol kezelés szignifikánsan csökkentette a vesékből kitenyésztett élő gombasejtek számát, így mind a fluconazol, mind pedig az amphotericin B hatékonynak bizonyult. Bár a „psilosis” csoport tagjai a glukán szintetáz enzimben megtalálható aminosav-csere miatt kevésbé számítanak érzékenynek az echinocandinok ellen, a napi 5 mg/kg caspofungin adagolás hatékony volt a három gombafaj minden izolátuma ellen. Mivel a rutin diagnosztikai módszerek jelenleg nem alkalmasak a „psilosis” csoportba tartozó három faj pontos elkülönítésére, ezért a sikeres terápiát megalapozó in vitro érzékenységi vizsgálatok, az újabb érzékenységi határértékek felhasználásával segíthetik a kevéssé ismert fajok okozta fertőzések eredményes kezelését. Az in vitro és in vivo eredményeink azt mutatják, hogy a C. parapsilosis sensu stricto, a C. orthopsilosis és a C. metapsilosis fajok okozta fertőzések kezelései alapvetően nem különböznek egymástól, azaz a beteg klinikai állapotától függően a fluconazol, az amphotericin B és a caspofungin is alkalmazható terápiás alternatívának számít. The C. parapsilosis sensu lato species was separated into C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis and C. metapsilosis using molecular biological methods. According to the literature the in vitro antifungal susceptibility of the latter two species differ from the C. parapsilosis sensu stricto’s, however treatment guidelines only known for the C. parapsilosis sensu stricto. First we performed time-kill studies with amphotericin B, fluconazole, voriconazole, posaconazole and 5-fluorocytosine in our work. Against all of the three members of the group amphotericin B was fungicidal at 1-4 µg/mL. Fluconazole proved to be fungistatic at ≤8 µg/mL concentrations against all of the members of the „psilosis” group. Voriconazole, posaconazole and 5-fluorocytosine showed excellent fungistatic activity against all of the three members of the group at concentrations still attainable in the blood. However most C. orthopsilosis isolates were only inhibited at 4-8×MIC voriconazole concentrations. In case of the temporarly neutropenic mice 1 mg/kg daily amphotericin B 10 and 20 mg/kg daily fluconazole treatments significantly reduced the tissue fungal burden against all of the members of the „psilosis” group, thus both fluconazole and amhotericin B proved to be efficacious. Although the members of the „psilosis” group have reduced echinocandin susceptibilities due to the amino-acid change in the glucan synthas enzyme, the daily dosage of 5 mg/kg CAS was effective against all of the isolates of the three species. The basis of a successful treatment is the in vitro susceptibility testing which together with the recent susceptibility breakpoints can help to effectively cure the infections caused by the less known species as the routine diagnostic methods are currently not capable of the accurate separation of the „psilosis” group. Our in vitro and in vivo results show that the treatment of the C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis and C. metapsilosis infections do not differ basically, thus depending on the clinical status of the patients fluconazole, amphotericin B and also caspofungin are considered as applicable therapeutic alternatives.N