Untersuchungen zu TNF in Monozyten von Patienten mit RA und gesunden Spendern

Die Rheumatoide Arthritis ist die häufigste inflammatorische Arthritis mit einer Prävalenz von 0.5-1%. Pathophysiologisch spielen intrinsische Dysregulationen der Zytokinexpression insbesondere von TNF von Monozyten eine bedeutende Rolle. Die Regulation der TNF Expression ist komplex und manifestiert sich in erster Linie posttranslational. Hier steht das proteolytische Shedding durch die Metalloproteinase TACE, sowie deren Inhibierung durch TIMP-3 im Vordergrund. Ziel der Arbeit war die Aufdeckung potentieller Fehlsteuerungen der monozytären TNF Expression und der betreffenden regulatorischen Proteine, sowohl auf Ebene der mRNA Expression als auch posttranslational. Es konnte gezeigt werden, das Monozyten von RA Patienten vermehrt intrazelluläres TNF exprimieren. Der Anteil TIMP-3 positiver Monozyten scheint bei RA Patienten tendenziell vermindert zu sein.:1. Einleitung 1 1.1. Die Rheumatoide Arthritis 1 1.1.1. Epidemiologie und Klinik 1 1.1.2. Ätiologie und Pathogenese 1 1.2 Der Tumornekrosefaktor 3 1.2.1 Struktur und Signaltransduktion von TNF 4 1.2.2 Regulationsmechanismen der TNF Expression in Monozyten 5 1.3 Fragestellung und Ziele 9 2. Material und Methoden 11 2.1 Rekrutierung von Patienten und gesunden Probanden 11 2.2 Materialien 12 2.3 Methoden 15 2.3.1 Separation von PBMCs mittels Dichtegradientenzentrifugation 15 2.3.2 Separation von Monozyten mit negativer Magnetseparation 15 2.3.3 Bestimmung der monozytären Expression von TACE mittels Durchflusszytometrie 16 2.3.4 Bestimmung der intrazellulären Expression von TNF, TIMP-3 und PR-3 in Monozyten 17 2.3.5 Messung der TNF und TNF Rezeptor 2 Sekretion von Monozyten mit Hilfe eines ELISA 17 2.3.6 Bestimmung der RNA Expression von TNF, TIMP-3,TACE und PR-3 in Monozyten mittels Real Time PCR 19 2.4 Statistische Auswertung 20 3. Ergebnisse 21 3.1 Deskriptive Statistik der Kohorten 21 3.2 Expression der mRNA von TNF, TACE, TIMP-3 und PR-3 in Monozyten 22 3.3 Expression von TACE auf Monozyten 23 3.4 Expression von intrazellulärem TNF, TIMP-3 und PR-3 in Monozyten 24 3.5 Sekretion von TNF und TNFR2 von Monozyten 28 4. Diskussion 32 4.1 Expression von TNF sowie regulatorischer Moleküle auf mRNA Ebene 32 4.2 Expression von tmTNF und TACE auf der Oberfläche von Monozyten 35 4.3 Intrazelluläres Vorkommen von TNF sowie regulatorischer Moleküle in Monozyten 36 4.4 Sekretion von TNF und TNFR2 durch Monozyten 39 5. Zusammenfassung 42 6. Literaturverzeichnis 47 7. Abbildungsverzeichnis 61 8. Eigenständigkeitserklärung 63 9. Lebenslauf 63 10. Danksagung 6