Synthetic stigmastanes with dual antiherpetic and immunomodulating activities inhibit ERK and Akt signaling pathways without binding to glucocorticoid receptors

Background: We have previously shown that some synthetic hydroxylated stigmastanes derived from plant sterols inhibit in vitro HSV-1 replication in ocular cell lines and decrease cytokine production in stimulated macrophages, suggesting that these steroids might combine antiviral and immunomodulating properties. In this paper we report the synthesis of some analogues fluorinated at C-6 in order to study the effect of this modification on bioactivity.Methods: The following methods were used: organic synthesis of fluorinated analogs, cytotoxicity determination with MTT assays, cytokine production quantification with ELISAs, glucocorticoid activity determination by displacement assays, immunofluorescence and transcriptional activity assays, studies of the activation of signaling pathways by Western blot, antiviral activity evaluation through virus yield reduction assays.Results: We report the chemical synthesis of new fluorinated stigmastanes and show that thisfamily of steroidal compounds exerts its immunomodulating activity by inhibiting ERK and Akt signaling pathways, but do not act as glucocorticoids. We also demonstrate that fluorination enhances the antiviral activity.Conclusions: Fluorination on C-6 did not enhance the anti-inflammatory effect, however, an increase in the in vitro antiviral activity was observed. Thus, our results suggest that it is possible to introduce chemical modifications on the parent steroids in order to selectively modulate one of the effects.General significance: This family of steroids could allow the development of an alternative treatment for ocular immunopathologies triggered by HSV-1, without the undesirable side effects of the currently used drugs.Fil: Michelini, Flavia Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Bueno, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Molinari, Alejandro Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Galigniana, Mario Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Galagovsky, Lydia Raquel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; ArgentinaFil: Alche, Laura Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Ramirez, Javier Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; Argentin