A mostly-automated «In Vivo» microtubule-tracking protocol

Microtubules are long polymers that form an integral part of the cytoskeleton, an intracellular, dynamic scaffold responsible for coordinating cell movement, intracellular transport, and cell division. Misregulation of the microtubule cytoskeleton can lead to various developmental problems and has been implicated in certain cancers. Microtubules can be studied in vitro and such experiments have been highly informative as to the molecular basis of their growth dynamics. To gain a deeper understanding, however, microtubules must be studied in vivo, in the context of the complete cell. In contrast to in vitro experiments, there is no simple and straightforward way to analyze the data that result from in vivo experiments. Here, using readily-available software, I have built up a microtubule tracking protocol that goes from raw data (time-lapse videos of growing microtubules) to statistical summaries of microtubule growth rates. The protocol is flexible, straightforward, time-efficient, and mostly automatic.Les microtubules sont de longs polymères qui forment partie intégrale du cytosquelette, une structure dynamique responsable pour la coordination de la motilité cellulaire, le transport intracellulaire et la division cellulaire. En fait, la dérégulation du cytosquelette microtubulaire peut causer des problèmes développementaux et est impliqué dans certains cancers. Les microtubules peuvent être étudiés in vitro par des expériences qui ont permis d'éclaircir les bases moléculaires de leur croissance dynamique. Cependant, afin d'obtenir une compréhension plus profonde sur eux, les microtubules doivent être étudiés in vivo, dans le contexte d'une cellule complète. Contrairement à l'analyse des expériences in vitro, on ne peut pas facilement et simplement analyser les images obtenues d'expériences in vivo. Pour cette raison, en utilisant des logiciels déjà disponibles, j'ai conçu un protocole pour localiser et suivre la position des microtubules et calculer des statistiques sur la vitesse de croissance des microtubules à partir des données brutes (des vidéos de microtubules en croissance). Le protocole est flexible, facile à utiliser, efficace et presque automatique